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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教大家关于dna提取的问题
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-09 06:24:38
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-09 06:24:54
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Originally posted by 换换 at 2010-06-08 17:30:06:



1 有降解的话，那能做AFLP吗？比如第一张图，我操作还算严格啊，样品放-80度，加缓冲液前用液氮处理，从脱离冰箱到加入液氮时间很短，不超过2分钟。
但是有可能样品在送来实验室之前冻融过，不过也就一二次 ...

提DNA怕的不是化冻的时间，而是提的过程中抽吸、震荡等导致的机械剪切
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11楼2010-06-08 17:34:20
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换换

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-08 17:34:20:


提DNA怕的不是化冻的时间，而是提的过程中抽吸、震荡等导致的机械剪切

哦，但我同学一样用的是试剂盒，操作都差不多，提出来的几乎一点没降解啊，
不同的是材料，他的是新鲜材料，就是一长出来马上提取幼叶dna，我的材料是从别处采集的，也是别处送过来的
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12楼2010-06-08 17:40:08
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-09 06:24:50
感觉DNA受蛋白污染了，我以前试剂盒提的时候也是到乙醇沉淀哪一步总会出现白色絮状团状物，也溶不掉，导致DNA得率非常低，没办法了用常规方法提了。
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望大家都各有所获！
13楼2010-06-09 00:56:25
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换换

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lyg7720349 at 2010-06-09 00:56:25:
感觉DNA受蛋白污染了，我以前试剂盒提的时候也是到乙醇沉淀哪一步总会出现白色絮状团状物，也溶不掉，导致DNA得率非常低，没办法了用常规方法提了。

是材料蛋白含量太高还是受蛋白污染了，我觉得应该是材料本身蛋白含量高吧

不知道白色沉淀会不会影响dna沉淀，反正我的得率也很低，你又用什么方法提的?效果怎么样？
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14楼2010-06-09 08:41:15
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们用CTAB法提取的是小麦叶片的DNA，效果挺好的呀，试剂都是自己配的，跑模板点1微升就可以了，多了有可能出现拖带，如果你对DNA质量要求较高，那在加了异丙醇后有DNA沉淀析出时用钩子把DNA勾出来就好了，不要去离心。
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15楼2010-06-09 10:23:07
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
强烈怀疑这是蛋白质杂质污染 里面很亮的那个很明显应该是了
可以做一下核酸定量分析 看看污染成分到底是蛋白质还是RNA
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16楼2010-06-10 14:25:05
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
461644楼: Originally posted by 换换 at 2010-06-08 17:30:06:
先谢谢大虾~~

1 有降解的话，那能做AFLP吗？比如第一张图，我操作还算严格啊，样品放-80度，加缓冲液前用液氮处理，从脱离冰箱到加入液氮时间很短，不超过2分钟。
但是有可能样品在送来实验室之前冻融过 ...

你是要做AFLP？现在做的怎么样啊？我也打算做AFLP，向日葵的，可是总是切不开，预扩就是一片，从点样孔开始到200bp都有弥散状，是怎么回事啊？
请加我QQ,174673844我想请教你，谢谢
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17楼2012-05-20 22:48:48
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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引用回帖:
461743楼: Originally posted by 换换 at 2010-06-08 17:33:14:
呵呵，我做AFLP，貌似要求比较高。。。。。。

但是我同学用我的降解的dna做出来了，而且条带也比较清晰

你QQ是多少，我的174673844，QQ交流关于AFLP,谢谢！
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18楼2012-05-20 22:52:07
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