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汕头大学海洋科学接受调剂
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换换

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教大家关于dna提取的问题 已有12人参与

我提的是植物基因组dna,用过ctab法和试剂盒,但效果都不理想,具体问题是
提取出的dna用1倍TE溶解后,会出现絮状沉淀,可以确定不是dna,因为放置两三天后还是有,dna经紫外分光光度计检测正常,但琼脂糖检测结果很不好,有拖尾。

我想请教大家这是什么原因,是dna降解还是有糖酚类杂质?如果是杂质该怎么去除?(我用的ctab法抽提两遍)

附上dna琼脂糖图片

都是用试剂盒提的





[ Last edited by 换换 on 2010-6-8 at 17:43 ]
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-09 06:24:38
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-09 06:24:54
引用回帖:
Originally posted by 换换 at 2010-06-08 17:30:06:



1 有降解的话,那能做AFLP吗?比如第一张图,我操作还算严格啊,样品放-80度,加缓冲液前用液氮处理,从脱离冰箱到加入液氮时间很短,不超过2分钟。
但是有可能样品在送来实验室之前冻融过,不过也就一二次 ...

提DNA怕的不是化冻的时间,而是提的过程中抽吸、震荡等导致的机械剪切
11楼2010-06-08 17:34:20
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查看全部 18 个回答

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-09 06:22:57
1.从带型上来看,你所提取的DNA都有降解的嫌疑;
不知道你的上样量是多少,最好再少取一些稀释之后在点样看看,如果只有一条主带那就是没有降解的(蚕豆那个样品应该是不会有问题的);
2.下面一块胶的样品不知道是否去RNA了,如果没有那就应该是降解了。
3楼2010-06-08 16:20:25
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zouting

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-09 06:23:19
我也用CTAB法提的,提的蚕豆根的,为的是说明凋亡,但是没跑出梯状条带,可是也没有拖尾什么的。当时做的时候是用PCI一次,CI总共三次
4楼2010-06-08 16:21:57
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crydevil

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
怀疑是操作剧烈 DNA断了,而且杂质也多了
6楼2010-06-08 16:33:13
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