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wolfmanh

[交流] 【求助】请教:检测波长问题? 已有4人参与

各位大侠,本人处理狗空白全血上液相感觉杂质很多主要在9分钟以前,问题是杂质峰拖尾影响后面的主药出峰,引起基线漂移,最郁闷的是主要出峰的位置空白血也有小峰,想调节流动相错开,调了几次但几乎都在一个位置出峰分不开,请问怎么办?
   新买的shim-pack C18柱子,柱温70,流动相先前用乙腈:甲醇:水=70:8:22,现在不用甲醇了,检测波长210nm.
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mytll

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铁甲骑兵(金币+1):具体什么试剂呢? 2010-06-08 14:31:38
我想你应该用离子对试剂试试
2楼2010-06-08 13:58:12
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wolfmanh

引用回帖:
Originally posted by mytll at 2010-06-08 13:58:12:
我想你应该用离子对试剂试试

样品处理过程如下:取全血1ml置于10ml,加一定量内标,加入NaOH溶液2ml,涡旋2min,加无水乙醚(重蒸)4ml,涡旋5min,3000 转每分钟离心15分钟,取乙醚层40度水浴氮气吹干,加入酸化甲醇溶液(盐酸:甲醇=1:3)200微升重组,加正己烷0.5ml涡旋30秒,3000转每分钟离心10分钟,弃去正己烷层去下层清夜20微升进样。
   大家看处理过程有什么问题?怎么优化?
3楼2010-06-08 22:29:20
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wolfmanh

怎么没谁给回答下?
4楼2010-06-09 10:13:31
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xkp123

木虫 (著名写手)


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怎么不考虑走梯度呢?
5楼2010-06-09 11:05:28
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wolfmanh

引用回帖:
Originally posted by xkp123 at 2010-06-09 11:05:28:
怎么不考虑走梯度呢?

主要是检测的主药在血浆跟血细胞里面都溶,大约各占50%吧 不稳定 所以只有测全血。处理过程是看了文献综合后的方法 大部分都是这么处理的,现在在尝试流动相中加入磷酸,三乙胺试下 能不能去杂质,实在不行跑梯度,这个波长基线是不是漂的厉害,固相萃取暂时没仪器做不了啊

固相萃取我有柱子但是没有仪器 ,还能怎么做?
6楼2010-06-09 16:54:30
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xkp123

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铁甲骑兵(金币+1):专家多关注此贴啊 2010-06-10 08:28:35
恩,这个波长已到了紫外的截止区了,大部分物质在这里都会有强烈的吸收,所以干扰很大是必然的,你的样品是什么类型的物质?PH值一定要控制好。你设下梯度试一下,原则是让难保留的物质缓慢流出,容易保留的物质快速洗脱除就行。
7楼2010-06-09 17:03:10
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yangliu77

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铁甲骑兵(金币+1):呵呵,学习了。 2010-06-10 08:28:50
关于血的确实不好分离,况且还是加内标物 的。我刚才看了你的流动相,很少人把乙腈跟甲醇配比然后跟水一起用的吧。你要么选择乙腈跟水,要么选择甲醇跟水配比,直接用水应该也不行,得弄个缓冲液,比如说磷酸一类的,具体的哪一种缓冲液,浓度为多少得看你实验需求。流动相设置一个梯度,这样更利于分离。还有,你进样前有没过滤膜?这个很关键哦。

至于那个检测波长,我以前做实验前查的文献中,所用的检测波长不一,你这方法经过改造的,也不能照搬人家所用的波长,建议你拿到紫外分光那边做个全波长扫描,比较好的吸收波长一目了然。
8楼2010-06-09 17:35:45
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wolfmanh

引用回帖:
Originally posted by xkp123 at 2010-06-09 17:03:10:
恩,这个波长已到了紫外的截止区了,大部分物质在这里都会有强烈的吸收,所以干扰很大是必然的,你的样品是什么类型的物质?PH值一定要控制好。你设下梯度试一下,原则是让难保留的物质缓慢流出,容易保留的物质快 ...

分析的主药为多肽类抗生素,现在可以肯定试剂没有干扰,就是血样里的杂质
9楼2010-06-09 20:54:05
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xkp123

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铁甲骑兵(金币+1):欢迎常来小木虫 2010-06-10 08:29:19
引用回帖:
Originally posted by wolfmanh at 2010-06-09 20:54:05:


分析的主药为多肽类抗生素,现在可以肯定试剂没有干扰,就是血样里的杂质

应该是碱性的吧,梯度加阴离子对试剂看看,PH值调到4-5
10楼2010-06-09 21:38:51
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