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wolfmanh

[交流] 【求助】请教:检测波长问题? 已有4人参与

各位大侠,本人处理狗空白全血上液相感觉杂质很多主要在9分钟以前,问题是杂质峰拖尾影响后面的主药出峰,引起基线漂移,最郁闷的是主要出峰的位置空白血也有小峰,想调节流动相错开,调了几次但几乎都在一个位置出峰分不开,请问怎么办?
   新买的shim-pack C18柱子,柱温70,流动相先前用乙腈:甲醇:水=70:8:22,现在不用甲醇了,检测波长210nm.
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yangliu77

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
铁甲骑兵(金币+1):呵呵,学习了。 2010-06-10 08:28:50
关于血的确实不好分离,况且还是加内标物 的。我刚才看了你的流动相,很少人把乙腈跟甲醇配比然后跟水一起用的吧。你要么选择乙腈跟水,要么选择甲醇跟水配比,直接用水应该也不行,得弄个缓冲液,比如说磷酸一类的,具体的哪一种缓冲液,浓度为多少得看你实验需求。流动相设置一个梯度,这样更利于分离。还有,你进样前有没过滤膜?这个很关键哦。

至于那个检测波长,我以前做实验前查的文献中,所用的检测波长不一,你这方法经过改造的,也不能照搬人家所用的波长,建议你拿到紫外分光那边做个全波长扫描,比较好的吸收波长一目了然。
8楼2010-06-09 17:35:45
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mytll

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
铁甲骑兵(金币+1):具体什么试剂呢? 2010-06-08 14:31:38
我想你应该用离子对试剂试试
2楼2010-06-08 13:58:12
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wolfmanh

引用回帖:
Originally posted by mytll at 2010-06-08 13:58:12:
我想你应该用离子对试剂试试

样品处理过程如下:取全血1ml置于10ml,加一定量内标,加入NaOH溶液2ml,涡旋2min,加无水乙醚(重蒸)4ml,涡旋5min,3000 转每分钟离心15分钟,取乙醚层40度水浴氮气吹干,加入酸化甲醇溶液(盐酸:甲醇=1:3)200微升重组,加正己烷0.5ml涡旋30秒,3000转每分钟离心10分钟,弃去正己烷层去下层清夜20微升进样。
   大家看处理过程有什么问题?怎么优化?
3楼2010-06-08 22:29:20
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wolfmanh

怎么没谁给回答下?
4楼2010-06-09 10:13:31
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