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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家的MTT法OD值是多少？
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骑着蜗牛追火箭

木虫 (著名写手)

纳米小生

[交流] 【求助/交流】大家的MTT法OD值是多少？ 已有5人参与

大家好，我最近做MTT，新手上路，OD值只有0.1-0.2，有人说太小，大家一般是多少？
我的做法是这样的，5000cell/孔，接种后过夜。一排八孔，设两排。一排只有细胞，用培养基培养，一排有细胞，并且有我的样品。A1孔为调零孔，没有细胞，其它操作与其它孔均相同。MTT5mg/mL，加入20uL，4h后，小心吸出上清液，加入150mLDMSO，振荡，检测。
做出来的图看起来还可以，就是OD值太小。想说明的是我的样品没有毒，也不影响细胞增殖，所以没有用成活率来做图。
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1楼 2010-06-03 11:33:35
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主
★ ★
lstt09nk(金币+2):热心虫友，欢迎交流~~ 2010-06-03 18:49:20
骑着蜗牛追火箭(金币+4):谢谢，我打算接种后培养两天再接药 2010-06-04 09:08:09
其他按规范操作，应该是细胞生长达到对数期70%-80%的时候进行加药。

另外就是你的细胞活力如何。这个也可以想象，如果每个细胞半死不活的，细胞再多，甲瓒也不会太多。如果细胞活力很大，少量的细胞估计甲瓒也足够了。
所有细胞量的多少要探索好的。

还有我用过不同品牌的MTT好像吸光值不太一样，我也不知道为啥，不过值得注意单因素，一直用同一个品牌的比较好吧。
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
7楼2010-06-03 17:43:02
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weiyanbme

木虫 (正式写手)
★ ★
骑着蜗牛追火箭(金币+3):我也想过，可是这样就看不出来增殖情况了 2010-06-03 11:42:12
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-06-03 12:42:56
引用回帖:
Originally posted by 骑着蜗牛追火箭 at 2010-06-03 11:33:35:
大家好，我最近做MTT，新手上路，OD值只有0.1-0.2，有人说太小，大家一般是多少？
我的做法是这样的，5000cell/孔，接种后过夜。一排八孔，设两排。一排只有细胞，用培养基培养，一排有细胞，并且有我的样品。A1 ...

个人觉得数值可以的，0.7以下最好了，你要是嫌小不好看的话，就比上空白组，用百分比来做图，好看些
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2楼2010-06-03 11:41:06
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weiyanbme

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 骑着蜗牛追火箭 at 2010-06-03 11:33:35:
大家好，我最近做MTT，新手上路，OD值只有0.1-0.2，有人说太小，大家一般是多少？
我的做法是这样的，5000cell/孔，接种后过夜。一排八孔，设两排。一排只有细胞，用培养基培养，一排有细胞，并且有我的样品。A1 ...

再问下，你加MTT之前，每孔内的体积为多少啊，一般200微升，加20微升后，就稀释10倍
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3楼2010-06-03 11:43:36
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主
骑着蜗牛追火箭(金币+3):谢谢，我用的细胞量是5000.不知道跟细胞种类有没有关系 2010-06-03 14:25:18
0.3-0.7都可以。看细胞量。
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
4楼2010-06-03 12:14:48
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