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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】电转化效率 已有3人参与

电转化大肠杆菌,转化的是DNA片段,电转杯是0.1的,条件是1500V,5ms,转了好多次都是失败,感受态制备时用10%的甘油1ml洗3次,转化时是先加5微升片段冰上放置5min,再加5微升再放5min,如何可以提高电转化的效率?先在这边谢过了!!
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上班族,学习ing……
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lingn at 2010-06-01 19:43:31:
拿已知浓度的质粒先测一下感受态的效果怎么样。如果好的话再转连接产物,如果没菌斑就是连接的问题了。
另外你3次都用1ml洗吗?洗不干净吧,前两次体积可以大一点,反正要离心的。
你居然加了10ul的连接产物,也 ...

板上有菌长出来,但是怀疑是抗生素浓度太低的原因,长的菌很小,长不大,这样是不是可以说明细胞没有爆啊?质粒这个还没有试过,下次做的时候做一个对照了,下次做感受态洗的时候就知道了,十分感谢!!
上班族,学习ing……
5楼2010-06-01 20:22:57
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小白兄

金虫 (小有名气)

★ ★
dhmdddd(金币+1):谢谢! 2010-06-01 19:30:11
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-06-02 22:36:19
我们实验室也是用的电转化,电压比你高1800V,一般我们是批量制感受态,放-80,转化时先冰上放置2-3min,质粒一般加1ul,连接产物转2ul,复苏1h,质粒一般涂1ul,连接产物看情况。我不知道你这里的DNA片段是没有环化的片段还是连接产物。你转化率低低到什么程度?
时光如流水,匆匆而过。
2楼2010-06-01 18:27:34
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 小白兄 at 2010-06-01 18:27:34:
我们实验室也是用的电转化,电压比你高1800V,一般我们是批量制感受态,放-80,转化时先冰上放置2-3min,质粒一般加1ul,连接产物转2ul,复苏1h,质粒一般涂1ul,连接产物看情况。我不知道你这里的DNA片段是没有环 ...

我用的电转杯是0.1的,所以电压没有用那么高的,我连的是DNA片段,不是环状的,2000多的吧,我涂布复苏1h后的细胞在氯霉素抗性平板上就是不长,抗生素的浓度比转化质粒的要低很多,就是没有单菌长出来……
上班族,学习ing……
3楼2010-06-01 19:29:15
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lingn

木虫 (正式写手)

★ ★
dhmdddd(金币+1):谢谢,还有问题请教! 2010-06-01 20:17:12
lstt09nk(金币+2):欢迎交流~ 2010-06-01 20:27:05
拿已知浓度的质粒先测一下感受态的效果怎么样。如果好的话再转连接产物,如果没菌斑就是连接的问题了。
另外你3次都用1ml洗吗?洗不干净吧,前两次体积可以大一点,反正要离心的。
你居然加了10ul的连接产物,也不怕爆,我最多加4ul。加多了很容易爆的,一旦爆了肯定长不出斑来。
4楼2010-06-01 19:43:31
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