24小时热门版块排行榜    

查看: 1601  |  回复: 7

dhmdddd

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】电转化效率 已有3人参与

电转化大肠杆菌,转化的是DNA片段,电转杯是0.1的,条件是1500V,5ms,转了好多次都是失败,感受态制备时用10%的甘油1ml洗3次,转化时是先加5微升片段冰上放置5min,再加5微升再放5min,如何可以提高电转化的效率?先在这边谢过了!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

上班族,学习ing……
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白兄

金虫 (小有名气)

★ ★
dhmdddd(金币+1):谢谢! 2010-06-01 19:30:11
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-06-02 22:36:19
我们实验室也是用的电转化,电压比你高1800V,一般我们是批量制感受态,放-80,转化时先冰上放置2-3min,质粒一般加1ul,连接产物转2ul,复苏1h,质粒一般涂1ul,连接产物看情况。我不知道你这里的DNA片段是没有环化的片段还是连接产物。你转化率低低到什么程度?
时光如流水,匆匆而过。
2楼2010-06-01 18:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 小白兄 at 2010-06-01 18:27:34:
我们实验室也是用的电转化,电压比你高1800V,一般我们是批量制感受态,放-80,转化时先冰上放置2-3min,质粒一般加1ul,连接产物转2ul,复苏1h,质粒一般涂1ul,连接产物看情况。我不知道你这里的DNA片段是没有环 ...

我用的电转杯是0.1的,所以电压没有用那么高的,我连的是DNA片段,不是环状的,2000多的吧,我涂布复苏1h后的细胞在氯霉素抗性平板上就是不长,抗生素的浓度比转化质粒的要低很多,就是没有单菌长出来……
上班族,学习ing……
3楼2010-06-01 19:29:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingn

木虫 (正式写手)

★ ★
dhmdddd(金币+1):谢谢,还有问题请教! 2010-06-01 20:17:12
lstt09nk(金币+2):欢迎交流~ 2010-06-01 20:27:05
拿已知浓度的质粒先测一下感受态的效果怎么样。如果好的话再转连接产物,如果没菌斑就是连接的问题了。
另外你3次都用1ml洗吗?洗不干净吧,前两次体积可以大一点,反正要离心的。
你居然加了10ul的连接产物,也不怕爆,我最多加4ul。加多了很容易爆的,一旦爆了肯定长不出斑来。
4楼2010-06-01 19:43:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lingn at 2010-06-01 19:43:31:
拿已知浓度的质粒先测一下感受态的效果怎么样。如果好的话再转连接产物,如果没菌斑就是连接的问题了。
另外你3次都用1ml洗吗?洗不干净吧,前两次体积可以大一点,反正要离心的。
你居然加了10ul的连接产物,也 ...

板上有菌长出来,但是怀疑是抗生素浓度太低的原因,长的菌很小,长不大,这样是不是可以说明细胞没有爆啊?质粒这个还没有试过,下次做的时候做一个对照了,下次做感受态洗的时候就知道了,十分感谢!!
上班族,学习ing……
5楼2010-06-01 20:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingn

木虫 (正式写手)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-06-02 22:36:32
dhmdddd(金币+1):谢谢! 2010-06-03 13:33:33
引用回帖:
Originally posted by dhmdddd at 2010-06-01 20:22:57:


板上有菌长出来,但是怀疑是抗生素浓度太低的原因,长的菌很小,长不大,这样是不是可以说明细胞没有爆啊?质粒这个还没有试过,下次做的时候做一个对照了,下次做感受态洗的时候就知道了,十分感谢!!

抗生素浓度高了,菌长的就慢。浓度低的话,应该是长的快才对啊。如果是阳性的,时间长了总会长大的呀。是一个一个斑吗?还是一片的?
6楼2010-06-02 22:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lingn at 2010-06-02 22:09:43:


抗生素浓度高了,菌长的就慢。浓度低的话,应该是长的快才对啊。如果是阳性的,时间长了总会长大的呀。是一个一个斑吗?还是一片的?

是一片的,并且菌长不大,同样浓度的抗生素质粒转化的长的明显电转化的快,并且大……有一片的菌长出来是不是就说明电转化时没有爆啊?
上班族,学习ing……
7楼2010-06-03 13:36:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingn

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by dhmdddd at 2010-06-03 13:36:41:



是一片的,并且菌长不大,同样浓度的抗生素质粒转化的长的明显电转化的快,并且大……有一片的菌长出来是不是就说明电转化时没有爆啊?

不能说明,长的一片的都是死的菌。如果爆的话,会听到轻微的一声响。
8楼2010-06-04 13:47:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dhmdddd 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +21 rare12345 2026-03-18 21/1050 2026-03-20 14:31 by 无懈可击111
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-19 9/450 2026-03-20 12:33 by lature00
[考研] 274求调剂 +8 S.H1 2026-03-18 8/400 2026-03-20 11:53 by 学员8dgXkO
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +3 lemonzzn 2026-03-17 4/200 2026-03-20 11:04 by lemonzzn
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +6 吃吃吃才有意义 2026-03-19 6/300 2026-03-20 10:47 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 14/700 2026-03-20 10:46 by EBSD
[考研] 材料专硕英一数二306 +6 z1z2z3879 2026-03-18 6/300 2026-03-20 08:49 by xingguangj
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +14 陌の森林 2026-03-18 14/700 2026-03-19 22:38 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
信息提示
请填处理意见