应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】电转化效率
51/1返回列表
查看: 1589  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】电转化效率 已有3人参与

电转化大肠杆菌，转化的是DNA片段，电转杯是0.1的，条件是1500V，5ms，转了好多次都是失败，感受态制备时用10%的甘油1ml洗3次，转化时是先加5微升片段冰上放置5min，再加5微升再放5min，如何可以提高电转化的效率？先在这边谢过了！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
上班族，学习ing……
1楼 2010-06-01 16:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingn

木虫 (正式写手)
★ ★
dhmdddd(金币+1):谢谢，还有问题请教！ 2010-06-01 20:17:12
lstt09nk(金币+2):欢迎交流~ 2010-06-01 20:27:05
拿已知浓度的质粒先测一下感受态的效果怎么样。如果好的话再转连接产物，如果没菌斑就是连接的问题了。
另外你3次都用1ml洗吗？洗不干净吧，前两次体积可以大一点，反正要离心的。
你居然加了10ul的连接产物，也不怕爆，我最多加4ul。加多了很容易爆的，一旦爆了肯定长不出斑来。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-06-01 19:43:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

小白兄

金虫 (小有名气)
★ ★
dhmdddd(金币+1):谢谢! 2010-06-01 19:30:11
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-02 22:36:19
我们实验室也是用的电转化，电压比你高1800V，一般我们是批量制感受态，放-80，转化时先冰上放置2-3min，质粒一般加1ul，连接产物转2ul，复苏1h，质粒一般涂1ul，连接产物看情况。我不知道你这里的DNA片段是没有环化的片段还是连接产物。你转化率低低到什么程度？
赞一下(1人) 回复此楼
时光如流水，匆匆而过。
2楼2010-06-01 18:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 小白兄 at 2010-06-01 18:27:34:
我们实验室也是用的电转化，电压比你高1800V，一般我们是批量制感受态，放-80，转化时先冰上放置2-3min，质粒一般加1ul，连接产物转2ul，复苏1h，质粒一般涂1ul，连接产物看情况。我不知道你这里的DNA片段是没有环 ...

我用的电转杯是0.1的，所以电压没有用那么高的，我连的是DNA片段，不是环状的，2000多的吧，我涂布复苏1h后的细胞在氯霉素抗性平板上就是不长，抗生素的浓度比转化质粒的要低很多，就是没有单菌长出来……
赞一下 回复此楼
上班族，学习ing……
3楼2010-06-01 19:29:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lingn at 2010-06-01 19:43:31:
拿已知浓度的质粒先测一下感受态的效果怎么样。如果好的话再转连接产物，如果没菌斑就是连接的问题了。
另外你3次都用1ml洗吗？洗不干净吧，前两次体积可以大一点，反正要离心的。
你居然加了10ul的连接产物，也 ...

板上有菌长出来，但是怀疑是抗生素浓度太低的原因，长的菌很小，长不大，这样是不是可以说明细胞没有爆啊？质粒这个还没有试过，下次做的时候做一个对照了，下次做感受态洗的时候就知道了，十分感谢！！
赞一下 回复此楼
上班族，学习ing……
5楼2010-06-01 20:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +8 小熊joy 2026-03-14 8/400 2026-03-17 17:29 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +3 beefly 2026-03-14 3/150 2026-03-17 16:45 by RRRKKK
[考研] 材料与化工求调剂 +5 为学666 2026-03-16 5/250 2026-03-17 16:40 by 无际的草原
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考博] 26申博 +4 八旬速览 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭