应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】各位大侠，请教个问题！
51/1返回列表
查看: 1228  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ottolzm

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】各位大侠，请教个问题！ 已有3人参与

各位大侠，我前段时间在坛子里学到了不少关于PCR和基因工程的经验，今天来此想请教大家，我已经将我所需要的基因组DNA提取出来了，我用试剂盒提取的，链霉菌菌体量大概覆盖住1.5毫升离心管底部，最后用50微升无菌水溶解，吸取4微升进行电泳检测，虽然条带正常 ，但是浓度我总觉得不够，请教大家，这样能否进行下一步，PCR，？还有就是在进行PCR时那个经典的反应的温度除了退火温度以外 其他的需不需要改变？这个退火温度是引物在没加酶切位点前的温度，还是加了酶切位点后的温度，因为Oligo分析，这两个温度是不一样的，呵呵 虽然是菜鸟级的问题，但是对我却是极为重要的问题，谢谢大家的帮助，祝坛子“越来越大，越来越深”！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-17 20:27:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yinsongna

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR的话模板2.5ug就够了，你真不放心就测个OD值
那个退火温度不一样是指导两对不同的引物还是什么？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-17 21:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1):积极交流奖 2010-05-18 09:49:07
呵呵 谢谢楼上的  yinsongna   那个退火温度是我给引物加了酶切位点和没有加酶切位点时 Oligo分析的退火温度 两个温度不一样 我现在不明白的是 在做PCR的时候 应该是用哪一个退火温度来作为我PCR的退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-18 08:23:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-05-18 09:48:43
最好的是先用不带酶切位点的退火温度跑5个循环，再用带酶切位点的退火温度跑25-30个循环，

变性及延伸时间请参照所用的酶的说明书，不同的酶最佳条件稍有差别的
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-05-18 09:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)
呵呵 谢谢楼上的各位大侠
赞一下 回复此楼
5楼2010-05-18 20:53:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ottolzm 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭