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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家来交流加样的经验吧
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kiki1289

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家来交流加样的经验吧 已有6人参与

我觉得加样是很重要的，特别是微量加样，就那么一点点如果加不好实验就白做啦。大家都来交流一下自己如何精确加样的经验吧，师兄师姐们谢谢了。
比如我今天跑PCR，加0.32ul，我小心翼翼的把EP管拿起来，看着枪头里那么一点点液体加到管子里。我想这样做就能保证准确吧。
恩，先讲到这里了。
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1楼 2010-05-14 13:57:54
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wangxueqin

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
配PCR没有你说的那么恐怖吧， 如果加得多的话， 像你那样加怕是会累死，又容易加错呢，可以直接把枪头伸进液面以下加。
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2楼2010-05-14 14:07:47
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kiki1289

银虫 (小有名气)
是，我也觉得过于费力，所以想了解大家的做法，怎样轻松而准确
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3楼2010-05-14 14:32:34
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果做的PCR多的话可以一起配置反应液再分装呀，那样的话就不会有那么少了，会准备一点的，不过要混匀。
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4楼2010-05-14 15:08:27
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很好的经验，感谢分享~~ 2010-05-14 16:27:25
说些我的经验吧，不知道对大家来说是否有用。
1、如果是加PCR的样，量多的时候可以先分装再加样，但一定要充分混匀才行，否则就还不如单个单个加了。需要注意的是如果是用的不是有热启动功能的酶那么一定要酶单独家，否则在你混匀的过程当中就已经开始反映了，这时候得到的结果不是目标序列。反正最后加酶就对了，要不就选择功能改善的酶。
2、如果单枪加样那加微量样品的时候一定要伸到页面以下，而且要每次换枪头，否则你的试剂就被污染了，我之前也在一个帖子上说过这个事情，就是在这些小地方如果过于节省会造成昂贵试剂上的重大污染损失。所以各位实验达人们还是建议老板用更好的耗材也都一次性使用吧。一旦没有勤换枪头造成了试剂污染那就不是几毛钱几块钱耗材的损失，而是几千几万试剂的损失和珍贵样品的损失了，最终还要找好久才能找出是哪个试剂被污染了。就是说加样的时候为了加的更准，一定要伸到页面以下去加，但伸到页面以下就要每次换枪头。
3、再说个小技巧方面的东西，我们有时候在实验当中是要让加好的试剂避免起泡的，否则很容易在机器运转过程中出现试剂混合不均匀甚至得到的结果不准确等等的情况。这个怎么来说呢，好像只有做出来才能说明白，我试着讲吧，如果我没说明白就发站内信给我，我再解释吧。我举个例子吧，如果想加样200微升，而且加样过程中是加的同样的试剂，还不加到液面以下，那我们就不换枪头（排枪加样的时候使用更好）。加样枪有两个档位，我们调好枪到200微升那通常是打到第一个档位的，吸好液体后加样的时候是把加样枪打到第二档的，这样200微升就都出去了，但通常到最后一点点的时候就产生了很多起泡。我们在吸液体的时候可以比第一档稍微在多一点，这样吸到枪头里的试剂就多余200微升了，但是加样时只打到第一档，这样出来的试剂就是正好200微升，不放开手直接去再次吸液体，再次加样只打到第一档加200微升。这样就每次加样后枪头当中都还有试剂在，就不会产生起泡了，大家可以试试。这个方法同样适用于混匀的操作当中，第一次打到第一档以下一点点，然后混匀的时候就打到第一档就可以了。这里说的是只比第一档多打一点点就好，不用多出来太多。也不知道我说明白没
4、这个问题我也在之前一个帖子上说过，就是加样枪和枪头的问题。有些人喜欢EF的枪，有些人喜欢J的枪，但我喜欢RAININ的枪，真的好用。EF的枪太软，用起来不舒服，总觉得它不准，J家的枪太硬，女孩子用起来时间长了累，而且搭在手指的那个地方总感觉卡不住。还是R的枪好，手感好质量更好，加样准确度更加的没得说。这个好是有代价的，他的所有耗材不是国产枪头不搭，只能用规定的那一两个牌子的枪头，但这也就说明枪头的质量肯定没问题了，不会出现那种 排枪加样还得挨个孔对齐的情况，看准第一个孔了直接下手就奇准无比，不信看看其他的排枪，再用上不好的枪头，那哪叫排枪啊，所有枪尖都不在一条线上，插完了枪头还得一个一个用收再按一遍，否则中间的几个准在加样的时候掉链子，对准第一个孔一打样，肯定是有几个孔是加在外面的，那叫一个郁闷啊。声明一下我不是卖加样枪的，也最痛恨在木虫这么纯洁的地方做广告的人，所以别发消息问我哪里能买到R的枪，而且听说R的枪和耗材在国内也不是很好买得到。只是我的个人使用建议哈。
5、大量加样的时候需要计算试剂损耗，我这里有个通用的数字，就是单枪加样计算20%损耗，排枪加样计算40%损耗（用加样槽）。不过要是枪头超级不好，一沾液体就挂液，那损耗就更大了。
絮絮叨叨说了一堆，暂时就想起来这么多吧。
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5楼2010-05-14 16:03:39
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kiki1289

银虫 (小有名气)
恩 谢谢cqyniu
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6楼2010-05-14 16:07:03
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kiki1289

银虫 (小有名气)
ллamilie030312
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7楼2010-05-14 16:07:39
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lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-05-14 16:03:39:
说些我的经验吧，不知道对大家来说是否有用。
1、如果是加PCR的样，量多的时候可以先分装再加样，但一定要充分混匀才行，否则就还不如单个单个加了。需要注意的是如果是用的不是有热启动功能的酶那么一定要酶单独 ...

我也顺道学一回~~嘎嘎~
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坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
8楼2010-05-14 16:46:55
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kiki1289

银虫 (小有名气)
学习了，我想充分混匀用移液器反复吹打几次就行了吧？
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9楼2010-05-17 19:15:19
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菜鸟爱吃鱼

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菜鸟看到此贴表示很兴奋！
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10楼2013-07-03 16:44:52
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