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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SacI酶切位点的保护碱基怎么加，碱基表上的酶切效率只有10%啊
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zgb1982

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】SacI酶切位点的保护碱基怎么加，碱基表上的酶切效率只有10%啊 已有2人参与

RT，之前设计的酶切位点连T，现在酶切总是切不开，SmaI和SacI,搞不明白是哪里的问题？
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1楼 2010-05-13 12:58:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2010-05-13 13:10:18:
另外，酶切不开，考虑是 ...

上面没说加哪个碱基？我们用的是 new。。。 biolabs的酶 [/quote]

保护碱基与碱基数有关而与碱基组成无关
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4楼2010-05-13 19:07:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-13 19:43:59
Sac I和Sma I只需要一个保护碱基，你可以设计2个以求保险
http://www.fermentas.com/cn/supp ... cleavage-efficiency

看这个

另外，酶切不开，考虑是不是没纯化干净，以及用的酶是否失活了
现在我买内切酶一般考虑NEB或者Fermentas，日系、国产的一概不考虑，批次不稳定的
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-13 13:02:11
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zgb1982

木虫 (正式写手)
另外，酶切不开，考虑是 ... [/quote]

上面没说加哪个碱基？我们用的是 new。。。 biolabs的酶
赞一下 回复此楼
3楼2010-05-13 13:10:18
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