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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】AFLP
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xyls6868

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】AFLP 已有7人参与

请教各位大侠，有谁遇到过，大板上的条带有只有几个比较明显比较粗，而大多数条带都模糊不清的现象没？
  这种现象应该是pcr效率有问题吧，但是问题在哪呢？
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1楼 2010-05-12 09:38:12
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xyls6868

新虫 (小有名气)
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Originally posted by lyg7720349 at 2010-05-12 14:09:30:
你跑的是那种胶呢？

聚丙烯酰胺凝胶电泳
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3楼2010-05-12 19:01:34
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xyls6868

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhwenxing at 2010-05-12 19:50:22:
1、注意电压电流
2、注意凝胶的浓度是否合适。
3、注意上样量。
4、PCR加阳性对照和阴性对照。
5、跑胶温度。

请问一下大侠，你的以上各个要素的数量值各是多少呢？
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5楼2010-05-12 19:55:14
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xyls6868

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xyls6868 at 2010-05-12 19:55:14:

请问一下大侠，你的以上各个要素的数量值各是多少呢？

能参考一下吗？最近实在是迷茫呵呵。谢谢
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6楼2010-05-12 19:59:08
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xyls6868

新虫 (小有名气)
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Originally posted by yujiaping1 at 2010-05-12 22:59:13:
这种现象如果你的marker没有问题，百分之百是你的AFLP还没有做好，就是说任何环节都有可能有问题，不过我认为预扩和选扩一般问题不是很大，还是酶切连接的问题

但是酶切连接的结果该检测成什么样才算是结果比较好呢？
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9楼2010-05-13 09:05:20
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xyls6868

新虫 (小有名气)
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Originally posted by 狄林 at 2010-05-25 14:06:55:
我也出现类似的情况，做了个稀释倍数的梯度，选出的稀释倍数比较清晰，可是用整个种群跑的时候就又是模糊了。
你要解决了问题还望指教！

我的那种现象已经不明显了，但是我不知道是什么原因呢还，这期间我换过聚合酶，重新配过胶。。
  模糊的话，应该是分不清楚，胶有问题还是温度太高了，试试把功率调小，跑胶的时间长点呢？
我现在的问题是条带偏少呢。
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12楼2010-05-25 15:36:42
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xyls6868

新虫 (小有名气)
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Originally posted by 狄林 at 2010-05-26 10:39:41:
我跑胶是恒功率60w跑的。估计跑2个半小时。
带少是不是酶切的不够充分，影响了丰富度。

你那个问题，我还觉得是不是跟引物的种类有关呢？
我的情况还是不是很清楚呢，因为有的引物扩增后明显看到上下都有条带。有的引物是只上面有条带下面没有。
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14楼2010-05-26 14:21:21
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