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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】TSS法制备感受态的试剂选择
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nigel.lin

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】TSS法制备感受态的试剂选择 已有4人参与

小弟最近想用TSS法制备感受态，请问TSS法中的PEG，DMSO，Mgcl2和MgSO4都必须用进口优质试剂吗？ 用国产的效果如何？ 多谢！
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1楼 2010-05-07 00:15:38
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):good！ 2010-05-07 08:23:52
国产分析纯的也可，我用的北化的试剂，做出来pUC19在10的8次以上。

不过一定要过滤除菌，不能高压灭菌。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-05-07 02:26:12
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
能sigma最好啦，用量也不大
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-07 07:40:34
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liyong1981

金虫 (正式写手)
能说下TSS法的具体操作不？谢谢了～
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4楼2010-05-07 09:25:03
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nigel.lin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-05-07 02:26:12:
国产分析纯的也可，我用的北化的试剂，做出来pUC19在10的8次以上。

不过一定要过滤除菌，不能高压灭菌。

恩，谢谢！ 小弟有底了~~~
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5楼2010-05-08 00:01:07
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nigel.lin

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
plantaqp(金币+5):欢迎多来交流 2010-05-08 04:02:35
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-05-07 09:25:03:
能说下TSS法的具体操作不？谢谢了～



1. Afresh overnight culture ofbacteria is diluted 1:100 into prewarmed LB broth and the cells are incubated at 370C with shaking
(225 rpm) to an OD600 of 0.3-0.4.
2. An equal volume of ice-cold 2x TSS is added and the cell suspension is mixed gently. [TSS is LB broth with 10% PEG
(molecular weight 3350 or 8000), 5% DMSO, and 20-50 mM Mg2+ (MgSO4 or MgCl2) at a final pH of 6.5.]
3a. For long-term storage, cells are frozen immediately in a dry ice/ethanol bath and stored at -70°C.
3b. For transformation, a 0.1-ml aliquot of cells is pipetted into a cold polypropylene tube containing 1 ,ul (100 pg) of plasmid
DNA, and the cell/DNA suspension is mixed gently. (When frozen cells are used, cells are thawed slowly on ice and used
immediately.)
4. The cell/DNA mixture is incubated for 5-60 min at 4°C.
5. A 0.9-ml aliquot of TSS (or LB broth) plus 20 mM glucose is added, and the cells are incubated at 37°C with shaking (225
rpm) for 1 hr to allow expression of the antibiotic-resistance gene.
6. Transformants are selected by standard methods.
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6楼2010-05-08 00:08:53
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