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欣如止水

金虫 (小有名气)

[交流] 【问题反馈】求助转化问题 已有3人参与

用特异性引物扩增出与目的片段大小相同的片段割胶回收用于转化,片段长度1700bp左右,转化载体为pMD19-T,转化后M13引物验证,在1700bp处有条带,交于测序,可测序结果总是与目的片段不相符合,甚至与扩增目的片段的质粒上都无相似序列。请各位高手指点,到底是什么问题啊?
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liyong1981

金虫 (正式写手)


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1949stone(金币+1): 2010-04-30 12:31
那就是你扩增的不是你的目的片段了撒,这种情况时有的,记得很久以前,做RACE的时候,我的3端阔出来的,测序发现,根本不是我想要得到的片段,扩初的别的来了,而且很漂亮的带
2楼2010-04-30 11:36:35
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欣如止水

金虫 (小有名气)

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1949stone(金币+1): 2010-04-30 12:31

那就是你扩增的不是你的目的片段了撒,这种情况时有的,记得很久以前,做RACE的时候,我的3端阔出来的,测序发现,根本不是我想要得到的片段,扩初的别的来了,而且很漂亮的带

那要怎样解决啊?
3楼2010-05-04 10:11:14
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liyong1981

金虫 (正式写手)



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重新设计引物~~
4楼2010-05-04 10:23:06
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cato8163

银虫 (正式写手)


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你在转化后用菌液PCR检测时,用一条M13引物、一条目的条带引物,这样再去测序。这样不足之处是:只能检测到正向的或反向的。需多做菌液PCR。

[ Last edited by cato8163 on 2010-5-4 at 11:17 ]
5楼2010-05-04 11:06:27
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