| 查看: 2659 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
04swlcm
|
[交流]
【求助/交流】硫酸铵分级沉淀 已有7人参与
|
||
|
大家好： 我想请教大家是怎么去得到硫酸铵分级沉淀曲线的？我做了20-90%梯度，加的是固体硫酸铵，发现每个梯度上清酶活相差不大，并没得到两个点（一个上清酶活很高，一个上清几乎没酶活），请问大家是什么原因？谢谢 还有过DEAE-纤维素阴离子柱的时候，一共出现3个峰，就在前面几管（3-5管）就出现目的蛋白，而且只有这个峰有酶活，我怀疑是没挂上柱子，怎么改进啊？PAGE无条带~郁闷~~（目的蛋白等电点4.9，平衡缓冲液是0.05M的HAc-NaAc，PH5.5，用的是0.5MNaCl，0.05MHAc-NaAc梯度洗脱）。 [ Last edited by 04swlcm on 2010-4-28 at 10:37 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有237人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 硫酸铵沉淀脂肪酶的问题
已经有5人回复
- 硫酸沉淀一定是蛋白质吗？
已经有4人回复
- 求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题
已经有12人回复
- 发酵液中的甘油和乳糖
已经有8人回复
- 硫酸铵沉淀蛋白质
已经有16人回复
- 硫酸铵沉淀后透析，里面的沉淀是什么？
已经有6人回复
- 关于蛋白纯化的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】急求关于硫酸铵沉淀
已经有3人回复
- 【求助/交流】硫酸铵沉淀蛋白
已经有12人回复
- 【求助/交流】用硫酸铵盐析到饱和度90%了，酶活还是在上清液里，求助各位虫友！
已经有24人回复
- 【求助/交流】关于硫酸铵沉淀的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】硫酸铵沉淀蛋白
已经有6人回复
rhy1027
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6353.7
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 370
- 在线: 108.4小时
- 虫号: 509301
- 注册: 2008-02-22
- 专业: 抗体工程学
4楼2010-04-20 22:57:04
shwang007
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3737.2
- 散金: 1
- 红花: 4
- 帖子: 789
- 在线: 290.5小时
- 虫号: 313737
- 注册: 2007-02-24
- 性别: GG
- 专业: 食用真菌学
04swlcm(金币+1): 2010-04-19 10:38
|
不知LZ做的是哪个酶？测定方法是否稳定，尤其是反应体系不稳定会导致上述结果。 首先，DEAG是阴离子交换剂，平衡液的PH值与目的蛋白的PI太靠近，自然挂不上柱；建议提高buffer的PH降低其离子强度。如还不行，可以联系shwang70@yahoo.com.cn |
2楼2010-04-18 10:36:26
04swlcm 
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 804.9
- 散金: 18
- 帖子: 118
- 在线: 198.5小时
- 虫号: 616251
- 注册: 2008-10-03
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2010-04-19 10:42:38
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 2891.1
- 散金: 1276
- 红花: 43
- 帖子: 2259
- 在线: 277.9小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
★ ★
04swlcm(金币+2): 2010-04-28 10:23
lstt09nk(金币+2): 2010-04-28 20:08
04swlcm(金币+2): 2010-04-28 10:23
lstt09nk(金币+2): 2010-04-28 20:08
|
1、DEAE是一种弱阴离子交换树脂，不是阳离子交换剂。 2、离子交换的原理是低盐吸附，高盐洗脱。你的平衡缓冲盐浓度太高了。一般样品溶液的缓冲和盐浓度应和平衡缓冲一样，应该只有缓冲液，不另外添加其他盐类，以降低离子强度，增加结合的能力。 3、纯化时样品和缓冲的pH应与等电点有较大的差距，阴离子交换层析一般选择PB或Tris缓冲较好，前者pH7.4，或者9.0。你选择的乙酸盐缓冲pH5.5一般是阳离子交换的缓冲。 4、纯化时的pH可以与测酶活时的不一样啊，你纯化完了，如果要在某个pH下测酶活，你可以把Ph调过去测就可以了。 |
5楼2010-04-20 23:27:24
40