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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】玻璃珠破碎细胞
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】玻璃珠破碎细胞 已有5人参与

我要用玻璃珠法破碎酵母细胞提取粗酶液，加入0.5mm玻璃珠后需要多大转速离心才能破碎细胞，并且不破坏酶结构？

谢谢！！！
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1楼 2010-04-09 15:02:40
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塞外雨

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 2010-04-09 17:46
我用这方法提基因组和质粒，就是加适量的玻璃粉，漩涡振荡一分钟，冰浴一分钟，重复几次吧，我一般6到8次。
有这方面的文章，可以看一下
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只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
2楼2010-04-09 16:07:15
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xiaomi1208

金虫 (正式写手)
来学习学习  呵呵
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3楼2010-04-21 23:39:26
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Cells were broken with 1/3 volume of ice-chilled glass beads (0.5 mm BioSpecProducts, Bartesville, OK, USA) by vortexing four times for 1 min with 1 min intervals in an ice bath and centrifuged for 10 min centrifugation (15,000g) to clarify the supernatant A 20–60 Al supernatant was used for enzyme assay.
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4楼2010-04-22 21:15:21
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肖-洋

新虫 (初入文坛)
楼主问题解决了吗？我也遇到了相似的问题，希望可以指教一下，谢谢
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5楼2013-06-29 17:55:12
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)
★
1949stone: 金币+1, 可以分享一下文献出处啊 2013-07-01 08:07:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肖-洋 at 2013-06-28 21:55:12
楼主问题解决了吗？我也遇到了相似的问题，希望可以指教一下，谢谢

The samples were centrifuged at 3000×g for 10 min at 4 °C
and the pellets suspended in 5 mL of 0.05 mol L-1 Tris-HCl
buffer (pH 7.5). Suspended cells were then disrupted by
submitting them to a vortex for 5 min, in the presence of
5 g of glass beads (0.5 mm diameter). The disruption period
was 1 min separated by 30 s interval in an ice bath. Cell
debris and glass beads were then removed by centrifugation
for 10 min (3000×g, 4 °C) and the supernatant was used for
determinations of enzyme activity.
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肖-洋
6楼2013-06-30 02:08:48
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肖-洋

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by jackchen129 at 2013-06-30 02:08:48
The samples were centrifuged at 3000×g for 10 min at 4 °C
and the pellets suspended in 5 mL of 0.05 mol L-1 Tris-HCl
buffer (pH 7.5). Suspended cells were then disrupted by
submitting them to a ...

楼主提取的粗酶液是什么性质的酶？我提取的酶的酶活性最大酶活性在PH为5，那重悬的缓冲液的PH用调节吗？还有楼主怎么检测细胞确实破壁成功了,用显微镜吗？观察有什么现象？谢谢！
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7楼2013-06-30 08:47:30
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 肖-洋 at 2013-06-29 12:47:30
楼主提取的粗酶液是什么性质的酶？我提取的酶的酶活性最大酶活性在PH为5，那重悬的缓冲液的PH用调节吗？还有楼主怎么检测细胞确实破壁成功了,用显微镜吗？观察有什么现象？谢谢！...

一些循环的key enzyme。针对不同的酶，具体步骤你可以找一些英语参考文献。
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8楼2013-06-30 12:29:32
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肖-洋

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by jackchen129 at 2013-06-30 12:29:32
一些循环的key enzyme。针对不同的酶，具体步骤你可以找一些英语参考文献。...

恩，谢谢，那破壁是否成功怎么判定呢？
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9楼2013-06-30 20:34:03
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 肖-洋 at 2013-06-30 00:34:03
恩，谢谢，那破壁是否成功怎么判定呢？...

你只要按照英文参考文献上的步骤做都是会成功的
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10楼2013-07-01 02:22:30
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