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cui00008

银虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】逆转录第一链cDNA是否成功了，帮忙看一下已有4人参与

图1，是用clontech的smart race试剂盒反转录的第一链cDNA直接电泳的，marker后空了一个，后面有四个空点样，分别是试剂盒中参照的5’、3’和样品的5’、3’，图中（拍照不清楚），参照有两条带，样品的5’也有两条，3’基本看不到。第一链cDNA的转录是否成功了，内参是不是可以？

图2，是我用第一链cDNA，PCR后电泳的情况，marker后空了一个，后面有四个空点样，分别是样品5’的两个和3’的两个，都没有条带，不知道怎么回事？（我用提取的基因组dna，pcr是有条带的）

这说明cDNA没转成功，还是转后没有我要的片段？

[ Last edited by cui00008 on 2010-3-29 at 13:48 ]

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1楼 2010-03-29 13:46:05

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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-03-29 14:38

你好浪费啊，我用clontech合成的RACE cDNA一点都舍不得用来做电泳检测，我们一般就是拿以前成功的RACE检测一下，我没有发现失败的现象，所以现在都不检测，只要RNA的质量差不多，就不会有问题。
关于你没有跑出来的问题，首先你的引物是按照盒子说明设计的吗？你跑基因组有带是什么意思，用什么程序跑的基因组，怎么跑的，是把3RACE和5RACE引物作为上下游引物跑的吗？另外你的引物会不会是内含子区的？