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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】帮忙分析DNA/RNA电泳图
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pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】帮忙分析DNA/RNA电泳图

以下是我的电泳图，请大家帮忙分析：
（1）电泳时间是不是有些短了？
（2）总感觉亮度不够是怎么回事？RNA浓度太低?还是染色时间太短？还是RNA电泳过程中降解了太多？还是自己调节的问题？

（3）这样的结果可否能用呢？


谢谢
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1楼 2010-03-10 19:39:37
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pidou

木虫 (正式写手)
可是为什么没有人来帮忙分析呢？？
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2楼2010-03-10 20:03:54
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
pidou(金币+3):谢谢参与
首先，这样的结果一般是不能用的。至于是不是电泳时间短，有可能，但是LZ也没有说电泳了多长时间……基于LZ提供的信息，没有人分析，是比较正常的……
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3楼2010-03-10 22:34:51
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pidou

木虫 (正式写手)
我是用150V，15min后染色的。
提了三次了，每次都是这个样子。不是很清楚的样子。
所以我怀疑是不是染色的时间不够，所以导致亮度不够，显得模糊？？
引用回帖:
Originally posted by Charlie1331 at 2010-03-10 22:34:51:
首先，这样的结果一般是不能用的。至于是不是电泳时间短，有可能，但是LZ也没有说电泳了多长时间……基于LZ提供的信息，没有人分析，是比较正常的……

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4楼2010-03-10 22:45:59
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我想你跑的应该是是普通琼脂糖电泳而不是是甲醛变性胶电泳，如果是普通琼脂糖电泳，那15min时间有点长，一般150V只要5min就够了，跑的时间越久降解的越快，因为这毕竟不是变性胶，从第二张图上看18S远比28S要亮很多，这说明你的RNA基本都降解了，建议楼主下次跑电泳时间短一点，祝你成功！
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5楼2010-03-11 08:55:13
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特洛伊

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
甲醛使RNA完全变性之后，在胶中的迁移速度与其分子质量的log10成正比例，28S RNA大约4800bp，18S RNA大约1900bp。根据这个原理，可以大致判断RNA的条带及其完整性。

用普通的琼脂糖电泳也可以跑出来28S、18S以及5S的条带，其实没有什么问题的。在一般的情况下，普通的琼脂糖电泳也是可以的。不过单从电泳的效果来看，变性电泳可是好多了。补充一下。普通的琼脂糖电泳和甲醛变性电泳我都试过，感觉效果真的有差别。普通的琼脂糖电泳出来的RNA，28S和18S不太分得开。可能是没有变性的缘故，RNA的高级结构使其电泳迁移率不能真实地体现出其分子量的大小。甲醛变性电泳的结果看着就比较舒服。如果只是看看RNA有没有，或者有没有降解，偷偷懒用普通的琼脂糖电泳也可以。
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成本
6楼2010-03-11 10:04:23
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是电泳的问题，建议上个Marker
另外跑RNA，用普通琼脂糖，建议将EB放在胶里，后染色又要延长时间，使RNA降解更厉害
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7楼2010-03-11 13:02:21
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pidou

木虫 (正式写手)
谢谢你哦，美女，果然是高手啊！～～

佩服，佩服啊～～！！
引用回帖:
Originally posted by van0735 at 2010-03-11 08:55:13:
我想你跑的应该是是普通琼脂糖电泳而不是是甲醛变性胶电泳，如果是普通琼脂糖电泳，那15min时间有点长，一般150V只要5min就够了，跑的时间越久降解的越快，因为这毕竟不是变性胶，从第二张图上看18S远比28S要亮很 ...

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8楼2010-03-11 19:02:26
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pidou

木虫 (正式写手)
讲的很有道理啊！～～


下次记住了

谢谢
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-11 13:02:21:
是不是电泳的问题，建议上个Marker
另外跑RNA，用普通琼脂糖，建议将EB放在胶里，后染色又要延长时间，使RNA降解更厉害

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9楼2010-03-11 19:03:29
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