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汕头大学海洋科学接受调剂
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pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】帮忙分析DNA/RNA电泳图

以下是我的电泳图,请大家帮忙分析:
(1)电泳时间是不是有些短了?
(2)总感觉亮度不够是怎么回事?RNA浓度太低?还是染色时间太短?还是RNA电泳过程中降解了太多?还是自己调节的问题?

(3)这样的结果可否能用呢?


谢谢
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pidou

木虫 (正式写手)

可是为什么没有人来帮忙分析呢??
2楼2010-03-10 20:03:54
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Charlie1331

金虫 (正式写手)


pidou(金币+3):谢谢参与
首先,这样的结果一般是不能用的。至于是不是电泳时间短,有可能,但是LZ也没有说电泳了多长时间……基于LZ提供的信息,没有人分析,是比较正常的……
3楼2010-03-10 22:34:51
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pidou

木虫 (正式写手)

我是用150V,15min后染色的。
提了三次了,每次都是这个样子。不是很清楚的样子。
所以我怀疑是不是染色的时间不够,所以导致亮度不够,显得模糊??
引用回帖:
Originally posted by Charlie1331 at 2010-03-10 22:34:51:
首先,这样的结果一般是不能用的。至于是不是电泳时间短,有可能,但是LZ也没有说电泳了多长时间……基于LZ提供的信息,没有人分析,是比较正常的……

4楼2010-03-10 22:45:59
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我想你跑的应该是是普通琼脂糖电泳而不是是甲醛变性胶电泳,如果是普通琼脂糖电泳,那15min时间有点长,一般150V只要5min就够了,跑的时间越久降解的越快,因为这毕竟不是变性胶,从第二张图上看18S远比28S要亮很多,这说明你的RNA基本都降解了,建议楼主下次跑电泳时间短一点,祝你成功!
5楼2010-03-11 08:55:13
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特洛伊

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
甲醛使RNA完全变性之后,在胶中的迁移速度与其分子质量的log10成正比例,28S RNA大约4800bp,18S RNA大约1900bp。根据这个原理,可以大致判断RNA的条带及其完整性。

用普通的琼脂糖电泳也可以跑出来28S、18S以及5S的条带,其实没有什么问题的。在一般的情况下,普通的琼脂糖电泳也是可以的。不过单从电泳的效果来看,变性电泳可是好多了。补充一下。普通的琼脂糖电泳和甲醛变性电泳我都试过,感觉效果真的有差别。普通的琼脂糖电泳出来的RNA,28S和18S不太分得开。可能是没有变性的缘故,RNA的高级结构使其电泳迁移率不能真实地体现出其分子量的大小。甲醛变性电泳的结果看着就比较舒服。如果只是看看RNA有没有,或者有没有降解,偷偷懒用普通的琼脂糖电泳也可以。
成本
6楼2010-03-11 10:04:23
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是电泳的问题,建议上个Marker
另外跑RNA,用普通琼脂糖,建议将EB放在胶里,后染色又要延长时间,使RNA降解更厉害
7楼2010-03-11 13:02:21
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pidou

木虫 (正式写手)

谢谢你哦,美女,果然是高手啊!~~

佩服,佩服啊~~!!
引用回帖:
Originally posted by van0735 at 2010-03-11 08:55:13:
我想你跑的应该是是普通琼脂糖电泳而不是是甲醛变性胶电泳,如果是普通琼脂糖电泳,那15min时间有点长,一般150V只要5min就够了,跑的时间越久降解的越快,因为这毕竟不是变性胶,从第二张图上看18S远比28S要亮很 ...

8楼2010-03-11 19:02:26
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pidou

木虫 (正式写手)

讲的很有道理啊!~~


下次记住了

谢谢
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-11 13:02:21:
是不是电泳的问题,建议上个Marker
另外跑RNA,用普通琼脂糖,建议将EB放在胶里,后染色又要延长时间,使RNA降解更厉害

9楼2010-03-11 19:03:29
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