| 查看: 192 | 回复: 0 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 baisuilan 的 20 个金币 | |||
[交流]
【求助/交流】关于稳定细胞系构建的几点疑问
|
|||
|
一、用稳定表达siRNA的质粒构建稳定细胞系，最后的确筛出来好几株抗药细胞，但是只有两株目的基因被抑制到30%左右。请问大家，目的基因未被抑制的那些细胞株，可不可以做为抑制株的对照？我花了半年才构建成功，实在不想重新构建了。按道理来讲，应该用稳定表达随机siRNA的质粒同时构建稳定细胞系，做为我的对照，可是当时迷糊了。如果现在重新单只构建对照细胞系可以吗？ 二、用质粒构建稳定细胞系其实是非常不稳定的，师兄之前已经构建过，但养久了就不再表达外源siRNA，但是仍有抗药性。我最近筛细胞用的质粒，表达绿色荧光蛋白，所以可以用荧光显微镜追踪表达与否。结果发现同一空长起来的细胞，只有大约10%发绿光。这样的细胞株可用吗？ 三、逆转录病毒感染的方式构建稳定细胞系应该更靠谱些。但是我筛了好几轮，最后得到的细胞株都检测不到外源蛋白表达，但是有外源mRNA的表达。这是为啥呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有60人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复