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【求助/交流】关于稳定细胞系构建的几点疑问
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一、用稳定表达siRNA的质粒构建稳定细胞系，最后的确筛出来好几株抗药细胞，但是只有两株目的基因被抑制到30%左右。请问大家，目的基因未被抑制的那些细胞株，可不可以做为抑制株的对照？我花了半年才构建成功，实在不想重新构建了。按道理来讲，应该用稳定表达随机siRNA的质粒同时构建稳定细胞系，做为我的对照，可是当时迷糊了。如果现在重新单只构建对照细胞系可以吗？ 二、用质粒构建稳定细胞系其实是非常不稳定的，师兄之前已经构建过，但养久了就不再表达外源siRNA，但是仍有抗药性。我最近筛细胞用的质粒，表达绿色荧光蛋白，所以可以用荧光显微镜追踪表达与否。结果发现同一空长起来的细胞，只有大约10%发绿光。这样的细胞株可用吗？ 三、逆转录病毒感染的方式构建稳定细胞系应该更靠谱些。但是我筛了好几轮，最后得到的细胞株都检测不到外源蛋白表达，但是有外源mRNA的表达。这是为啥呢？ |
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