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xiaogang0909

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA跑胶2ul有目的带很清晰，但是胶回收时，上样量为20ul时跑电泳却降解� 已有3人参与

DNA跑胶2ul有目的带很清晰，但是胶回收时，上样量为20ul时跑电泳却降解了，目的带非常弱，而且胶回收后跑电泳什么也没有了，我的目的带大于20Kbp。请各位帮忙分析一下了 多谢多谢
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1楼 2010-01-29 10:48:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
粪便提取的DNA可以直接PCR的，能出目的条带
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
12楼2010-01-30 09:15:10
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普通回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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胶回收DNA？没看懂，你回收什么啊，PCR产物？
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2楼2010-01-29 10:50:35
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xiaogang0909

金虫 (正式写手)
就是从细胞里提取的基因组DNA,上样量2ul时检测，有清晰地大于20Kbp的条带。但是准备胶回收纯化时，上样量20ul时却大部分被降解了，目的条带很微弱。然后就把这微弱的胶切去回收吧，结果在跑电泳什么也没有了。现在问题是，为什么跑大孔时会降解呢？
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3楼2010-01-29 10:58:49
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
20k？好像超出了普通胶回收试剂盒的回收范围了。找回收大片段的盒子吧。
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Thank-you，so-blue.
4楼2010-01-29 10:59:31
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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引用回帖:
Originally posted by xiaogang0909 at 2010-01-29 10:58:49:
就是从细胞里提取的基因组DNA,上样量2ul时检测，有清晰地大于20Kbp的条带。但是准备胶回收纯化时，上样量20ul时却大部分被降解了，目的条带很微弱。然后就把这微弱的胶切去回收吧，结果在跑电泳什么也没有了。现在 ...

电泳没条带，可能是没回收到，不是降解了。
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Thank-you，so-blue.
5楼2010-01-29 11:00:48
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xiaogang0909

金虫 (正式写手)
不对啊，回收前检测的确提取到了所需要的DNA（就一条明显的大于20Kbp的条带）,只是一去跑胶回收凝胶（大孔），未切胶时却发现目的带量很少，而下方却有一条非常粗的DNA条带（大概小于2000bp）
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6楼2010-01-29 11:05:07
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solopen

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你胶回收的目的是做什么的，如果做PCR就不用回收
你回收不到可能是由于片段过大，不利于胶回收
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7楼2010-01-29 11:34:53
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xiaogang0909

金虫 (正式写手)
嗯 分析的是 但是我是从粪便里提取的DNA,所以有很多抑制PCR的成分
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8楼2010-01-29 22:33:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
记得当初建文库时是用透析袋而不是回收试剂盒，久了不做也淡忘了许多，也许现在很多DNA都能用试剂盒回收了吧。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2010-01-29 22:57:04
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得用纯化试剂盒比较适宜，哪有胶回收大于20kb片段的，肯定不行的
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10楼2010-01-29 23:12:29
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