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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】Tm值高于72度怎么办？
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luckyyan

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】Tm值高于72度怎么办？

小弟最近要扩段基因，但是退火温度软件给出的是75度左右。请各位高手指教一下该怎么办。由于必须从该位点起始，所以换引物不太可行。先谢过了~~~~
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1楼 2010-01-23 22:05:30
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引物长度是多少啊？
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生物资源交流QQ群：1044518333
2楼2010-01-23 22:24:38
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towindflower

新虫 (初入文坛)
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1949stone(金币+1): 1-24 00:31
其实你是可以不从你设计的实验的ATG位点开始PCR的，因为你是从CDNA扩增的完全可以从Cdna的序列开始设计，因为前面没有没有ATG应对蛋白表达没有影响，你的TM值太高，扩增会有问题，建议做温度梯度，或者用专门的高GC PCR buffer。
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3楼2010-01-23 22:28:27
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biogefart

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 1-24 00:31
生物学科是实验学科，做完了如果不行再找原因吧，我们的引物80度的Tm用53度都扩出来过
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闹太套
4楼2010-01-23 23:08:13
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pengl001

木虫 (小有名气)
★
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是啊  有些时候做出新东西是需要挑战一下的  我的引物TM值在60度左右，最低的时候做梯度从50度到58度都做了，结果50度的能扩出东西来，实验出真知！
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Yes,Ican!
5楼2010-01-24 00:55:45
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
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6楼2010-01-24 04:27:32
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gn2003_0

金虫 (小有名气)
★
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有点高，但是你先这么设计引物，做梯度看看
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7楼2010-01-24 09:02:42
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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我估计75度左右不会有问题，再高了就够呛了，我设计很多75度的，从72度开始touch down，都跑出来了，不太成问题的
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8楼2010-01-24 15:56:34
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luckyyan

新虫 (小有名气)
谢谢高手指点。
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9楼2010-02-06 17:45:24
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qdwmq

木虫 (正式写手)
★
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还是要取决于实验结果 也可以两步法
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10楼2010-02-07 00:05:42
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