应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】Tm值高于72度怎么办？
121/2返回列表12下一页
查看: 2280  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

luckyyan

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】Tm值高于72度怎么办？

小弟最近要扩段基因，但是退火温度软件给出的是75度左右。请各位高手指教一下该怎么办。由于必须从该位点起始，所以换引物不太可行。先谢过了~~~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-23 22:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引物长度是多少啊？
赞一下 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2010-01-23 22:24:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

towindflower

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 1-24 00:31
其实你是可以不从你设计的实验的ATG位点开始PCR的，因为你是从CDNA扩增的完全可以从Cdna的序列开始设计，因为前面没有没有ATG应对蛋白表达没有影响，你的TM值太高，扩增会有问题，建议做温度梯度，或者用专门的高GC PCR buffer。
赞一下(11人) 回复此楼
3楼2010-01-23 22:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 1-24 00:31
生物学科是实验学科，做完了如果不行再找原因吧，我们的引物80度的Tm用53度都扩出来过
赞一下(11人) 回复此楼
闹太套
4楼2010-01-23 23:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengl001

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是啊  有些时候做出新东西是需要挑战一下的  我的引物TM值在60度左右，最低的时候做梯度从50度到58度都做了，结果50度的能扩出东西来，实验出真知！
赞一下(1人) 回复此楼
Yes,Ican!
5楼2010-01-24 00:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2010-01-24 04:27:32
已阅   申请APEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

gn2003_0

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有点高，但是你先这么设计引物，做梯度看看
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-01-24 09:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我估计75度左右不会有问题，再高了就够呛了，我设计很多75度的，从72度开始touch down，都跑出来了，不太成问题的
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-01-24 15:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckyyan

新虫 (小有名气)
谢谢高手指点。
回复此楼
9楼2010-02-06 17:45:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qdwmq

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是要取决于实验结果 也可以两步法
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-02-07 00:05:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luckyyan 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:22 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +5 布布和一二 2026-08-08 8/400 2026-08-08 14:54 by archvillain
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭