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luckyyan

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】Tm值高于72度怎么办?

小弟最近要扩段基因,但是退火温度软件给出的是75度左右。请各位高手指教一下该怎么办。由于必须从该位点起始,所以换引物不太可行。先谢过了~~~~
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引物长度是多少啊?
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2010-01-23 22:24:38
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towindflower

新虫 (初入文坛)

★ ★
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1949stone(金币+1): 1-24 00:31
其实你是可以不从你设计的实验的ATG位点开始PCR的,因为你是从CDNA扩增的完全可以从Cdna的序列开始设计,因为前面没有没有ATG应对蛋白表达没有影响,你的TM值太高,扩增会有问题,建议做温度梯度,或者用专门的高GC PCR buffer。
3楼2010-01-23 22:28:27
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biogefart

木虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 1-24 00:31
生物学科是实验学科,做完了如果不行再找原因吧,我们的引物80度的Tm用53度都扩出来过
闹太套
4楼2010-01-23 23:08:13
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pengl001

木虫 (小有名气)


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是啊  有些时候做出新东西是需要挑战一下的  我的引物TM值在60度左右,最低的时候做梯度从50度到58度都做了,结果50度的能扩出东西来,实验出真知!
Yes,Ican!
5楼2010-01-24 00:55:45
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匿名

用户注销 (著名写手)


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6楼2010-01-24 04:27:32
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gn2003_0

金虫 (小有名气)


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有点高,但是你先这么设计引物,做梯度看看
7楼2010-01-24 09:02:42
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


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我估计75度左右不会有问题,再高了就够呛了,我设计很多75度的,从72度开始touch down,都跑出来了,不太成问题的
8楼2010-01-24 15:56:34
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luckyyan

新虫 (小有名气)

谢谢高手指点。
9楼2010-02-06 17:45:24
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qdwmq

木虫 (正式写手)


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还是要取决于实验结果 也可以两步法
10楼2010-02-07 00:05:42
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