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卢高飞

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】叶绿体完整度已有2人参与

各位虫友，叶绿体完整度如何测定，谢谢啊

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lugf

1楼2010-01-19 16:11:57

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09021122

木虫 (正式写手)

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卢高飞(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2,VIP+0): 1-19 18:05
卢高飞(金币+3,VIP+0): 1-20 23:28

二、叶绿体被膜完整度的测定

【原理】

由于铁氰化钾不能透过被膜，故完整叶绿体在等渗介质中不能进行铁氰化钾光还原的Hill反应。而失去完整被膜的叶绿体，铁氰化钾可以进入类囊体进行Hill反应。根据这一原理，比较胀破与未胀破的叶绿体Hill反应速率，就可计算叶绿体被膜的完整度。

【仪器与用具】

氧电极测氧全套装置（见实验20）；烧杯；微量进样器；洗耳球等。

【试剂】

测定介质Ⅰ和Ⅱ 见一。

100mmol/L铁氰化钾：称3.29g铁氰化钾溶于水，定容至100ml。

100mmol/L NH4Cl：称0.54g NH4Cl溶于水，定容至100ml。

适量叶绿体（20～50μg Chl/ml反应体系）。

【方法】

1．取0.1ml叶绿体提取液加到0.9ml的蒸馏水中并搅拌1min，使叶绿体被膜胀破，加1ml测定介质Ⅰ悬浮备用。

2．取0.1ml未胀破叶绿体提取液加入反应杯中，视反应杯体积加入测定介质Ⅱ，加入适量铁氰化钾和NH4Cl，使铁氰化钾和NH4Cl的最终浓度都为1mmol/L。搅拌，平衡1min，照光测定Hill反应放氧速率，记录5min，然后清洗反应杯。

3．将已胀破叶绿体加入反应杯中，再加入适量测定介质Ⅱ、铁氰化钾和NH4Cl，使反应体系物质最终浓度同未胀破叶绿体测定体系，测定过程同2。

4．分别计算胀破和未胀破的叶绿体测定体系中单位时间的放氧量(或Hill反应速率)。

5．计算被膜完整度。

被膜完整度（%）=
式中 A－胀破叶绿体单位时间内的放氧量（或Hill反应速率）

B－未胀破叶绿体单位时间内的放氧量（或Hill反应速率）

【注意事项】

1. 本实验所用试剂要存放在冰箱中，存放时间不宜过长，最好现配现用。

2. 叶绿体的分离要在0～4℃下进行，玻璃器皿和溶液都须预冷，操作要快，整个分离过程最好在5min内完成。

3. 离心过程中离心机的转速不宜过高，否则叶绿体中的淀粉粒会打破叶绿体被膜。

4. 被膜完整度的测定过程中，反应杯内破碎叶绿体与完整叶绿体的叶绿素含量应相等。