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815kathy

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请问割胶该注意什么啊

最近在做16S 的PCR,最后要测序,需要割胶,请教一下各位在割胶的时候需要注意什么呢,比如制胶的浓度、厚度为多少利于割胶,非常感谢!
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

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amisking(金币+2,VIP+0): 1-8 17:29
回收胶的浓度一般是0.6~0.8%
割胶时要快:DNA长时间暴露在紫外下会产生缺刻
准:多余的胶不要切,以免对后面的回收率产生影响
霉菌
2楼2010-01-08 08:56:55
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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amisking(金币+3,VIP+0): 1-8 17:29
我们胶回收时的浓度是1.2-2%,我是用盒子回收的,盒子对任意浓度都可以,但是高于2%的第一步要多加Buffer。如果楼主不是用盒子回收,应该要注意使用低熔点胶,不是标准琼脂糖
3楼2010-01-08 09:24:05
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cato8163

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by gxsulong at 2010-1-8 08:56:
回收胶的浓度一般是0.6~0.8%
割胶时要快:DNA长时间暴露在紫外下会产生缺刻
准:多余的胶不要切,以免对后面的回收率产生影响

关于回收浓度,小可没有太注意,但一般制胶厚一点。
切胶快,和2楼说的一样,怕突变和缺刻。
4楼2010-01-08 09:36:21
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unameder

木虫 (小有名气)

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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-8 18:26
动作要快,对眼睛对皮肤都不好,曾经一天割了很多,尽管有防护但还是双眼流泪
5楼2010-01-08 17:07:07
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1514132

至尊木虫 (著名写手)

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1949stone(金币+3,VIP+0): 1-8 18:26
切割目的条带的的时候尽量减少紫外灯照射的时间,尽量把目的叫切的小一些,在用试剂盒回收的时候,如果片段小的话,可以加一些异丙醇。胶的浓度的大小主要取决于你的目的条带的大小,一般是1%,条带越小,叫得浓度应该越大。
     另外,尽量选取PCR产物胶回收时机和,不要选取PCR产物纯化试剂盒。
6楼2010-01-08 18:23:30
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chong2009

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
请问如何才能提高胶回收效率?
7楼2010-01-08 19:58:47
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