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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请问割胶该注意什么啊
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815kathy

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请问割胶该注意什么啊

最近在做16S 的PCR，最后要测序，需要割胶，请教一下各位在割胶的时候需要注意什么呢，比如制胶的浓度、厚度为多少利于割胶，非常感谢！
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1楼 2010-01-08 08:50:23
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)
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amisking(金币+2,VIP+0): 1-8 17:29
回收胶的浓度一般是0.6~0.8%
割胶时要快：DNA长时间暴露在紫外下会产生缺刻
准：多余的胶不要切，以免对后面的回收率产生影响
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霉菌
2楼2010-01-08 08:56:55
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
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amisking(金币+3,VIP+0): 1-8 17:29
我们胶回收时的浓度是1.2-2%，我是用盒子回收的，盒子对任意浓度都可以，但是高于2%的第一步要多加Buffer。如果楼主不是用盒子回收，应该要注意使用低熔点胶，不是标准琼脂糖
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3楼2010-01-08 09:24:05
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cato8163

银虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by gxsulong at 2010-1-8 08:56:
回收胶的浓度一般是0.6~0.8%
割胶时要快：DNA长时间暴露在紫外下会产生缺刻
准：多余的胶不要切，以免对后面的回收率产生影响

关于回收浓度，小可没有太注意，但一般制胶厚一点。
切胶快，和2楼说的一样，怕突变和缺刻。
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4楼2010-01-08 09:36:21
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unameder

木虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-8 18:26
动作要快，对眼睛对皮肤都不好，曾经一天割了很多，尽管有防护但还是双眼流泪
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5楼2010-01-08 17:07:07
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1514132

至尊木虫 (著名写手)
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1949stone(金币+3,VIP+0): 1-8 18:26
切割目的条带的的时候尽量减少紫外灯照射的时间，尽量把目的叫切的小一些，在用试剂盒回收的时候，如果片段小的话，可以加一些异丙醇。胶的浓度的大小主要取决于你的目的条带的大小，一般是1%，条带越小，叫得浓度应该越大。
     另外，尽量选取PCR产物胶回收时机和，不要选取PCR产物纯化试剂盒。
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6楼2010-01-08 18:23:30
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chong2009

铁虫 (初入文坛)
★
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请问如何才能提高胶回收效率？
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7楼2010-01-08 19:58:47
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