应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR扩增问题：非特异条带！
171/2返回列表12下一页
查看: 1580  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yxx41

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增问题：非特异条带！ 已有6人参与

用报道的引物进行PCR，但是出现了很多非特异性条带：
泳道          模板              退火温度
1             cDNA              60
2             cDNA              58
3             cDNA              54
4             菌1总DNA       60
5             同上                 58
6            marker DL 2000
7             菌1总DNA       54
8             菌2总DNA       60
9                   同上           58
10                 同上           54

原因是何？如何解决？
回复此楼

» 猜你喜欢
内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
1楼 2009-12-31 16:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingfengwu

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢交流 12-31 17:10
yxx41(金币+3,VIP+0): 1-1 10:02
1 使用特异性高的PCR溶液进行，比如hot-start溶液，而不是用普通的taq
   这样比较容易扩增到特异性高的。takara公司有很多特异性很好的hot-start 酶。
2 把PCR protocol换成touch down等方式，不用一般的程序。
赞一下(12人) 回复此楼
2楼2009-12-31 17:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

85715623

木虫 (正式写手)
★
yxx41(金币+1,VIP+0): 1-1 10:02
应该考虑一下DNA提的怎么样啊？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-12-31 17:57:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoliang38

铁虫 (小有名气)
★
yxx41(金币+1,VIP+0): 1-1 10:02
我们只能说出所有问题的中的几个，你降低下引物的浓度吧 另外楼主你的目的条带是哪个？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-12-31 18:03:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新人小玥

木虫 (正式写手)
★
yxx41(金币+1,VIP+0): 1-1 10:02
换换酶试试
我也出现过这种问题
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-12-31 18:49:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-31 21:13
yxx41(金币+1,VIP+0): 1-1 10:02
查查引物的特异性
酶对特异性有很大影响么，学习了
赞一下(21人) 回复此楼
6楼2009-12-31 21:01:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
yxx41(金币+3,VIP+0): 1-1 10:02
1、建议退火温度范围在向上设置几度试试。看你的图好像也是温度越低，特异性越差啊。
2、个人认为虽然国外的文献可信度比较高，但也不能全信，国内国外造假的都大量存在。所以可能是报道的引物不可信。建议自己设计，文献只是参考。
赞一下(1人) 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
7楼2009-12-31 21:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2009-12-31 21:27:
1、建议退火温度范围在向上设置几度试试。看你的图好像也是温度越低，特异性越差啊。
2、个人认为虽然国外的文献可信度比较高，但也不能全信，国内国外造假的都大量存在。所以可能是报道的引物不可信。建议自己设 ...

觉得退火温度升几度说得比较有道理，根据我的经验，三度左右没有问题
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-01-03 09:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveinbattle

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用touch down看看
或者就是cDNA不太好~~不行就重新提一下看看
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-06 14:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Liling1990

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做过两条，还没见过这么多
赞一下(1人) 回复此楼
上升中。。。
10楼2010-01-06 17:27:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yxx41 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 申博发邮件 +6 Lmengk 2026-09-15 7/350 2026-09-17 23:36 by Lmengk
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-17 23:05 by cuPZTDXS3VOd
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 12/600 2026-09-17 22:15 by cuPZTDXS3VOd
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 3/150 2026-09-17 16:03 by 0ngsZVSCTS7z
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 15:29 by 0ngsZVSCTS7z
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 15:27 by 0ngsZVSCTS7z
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:15 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:29 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:27 by ObVzqQQh1rrE
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-17 13:17 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:15 by ObVzqQQh1rrE
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:38 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:16 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:52 by k06BKNblrGRH
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-17 02:38 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-16 14:36 by i3KBRD19ERkG
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭