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yxx41

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增问题:非特异条带! 已有6人参与

用报道的引物进行PCR,但是出现了很多非特异性条带:
泳道          模板              退火温度
1             cDNA              60
2             cDNA              58
3             cDNA              54
4             菌1总DNA       60
5             同上                 58
6            marker DL 2000
7             菌1总DNA       54
8             菌2总DNA       60
9                   同上           58
10                 同上           54

原因是何?如何解决?
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内事不决问百度,外事不决问Google,横批:wikipedia
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-31 21:13
yxx41(金币+1,VIP+0): 1-1 10:02
查查引物的特异性
酶对特异性有很大影响么,学习了
6楼2009-12-31 21:01:45
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qingfengwu

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢交流 12-31 17:10
yxx41(金币+3,VIP+0): 1-1 10:02
1 使用特异性高的PCR溶液进行,比如hot-start溶液,而不是用普通的taq
   这样比较容易扩增到特异性高的。takara公司有很多特异性很好的hot-start 酶。
2 把PCR protocol换成touch down等方式,不用一般的程序。
2楼2009-12-31 17:07:57
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85715623

木虫 (正式写手)


yxx41(金币+1,VIP+0): 1-1 10:02
应该考虑一下DNA提的怎么样啊?
3楼2009-12-31 17:57:27
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caoliang38

铁虫 (小有名气)


yxx41(金币+1,VIP+0): 1-1 10:02
我们只能说出所有问题的中的几个,你降低下引物的浓度吧 另外楼主你的目的条带是哪个?
4楼2009-12-31 18:03:38
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