应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒pcr假阳性问题
151/2返回列表12下一页
查看: 991  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒pcr假阳性问题

请问大家，筛选重组克隆时，用碱裂解法提取转化子的质粒，然后用提取的质粒做模板进行pcr验证。虽然提取的质粒有时弥散，但pcr为阳性，这种情况下，请问虫虫们，假阳性的概率多大？
因为测序需要自己设计引物，所以想有把握了再测序，希望大家给分析一下！
多谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-12-30 20:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2009-12-31 07:21:05
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2009-12-31 07:25:21
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般我们都是用菌液PCR用自己的特异引物来验证的，有一定的假阳性率，我做了三年也就出来一两个假阳性吧，整理提取后酶切验证时最好的办法，如果切下来你的目的条带，说明载体上肯定有你的插入片段啊，另外提取的质粒弥散可能是因为有蛋白（DNA酶的污染），再重提就是啦！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-12-31 08:49:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)
插入片段只有100bp， 酶切也不一定看的出来啊 ~
赞一下 回复此楼
5楼2009-12-31 11:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianpingpe

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
100bp电泳还是看的出来的，只有没有跑出胶
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-12-31 13:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先做菌落PCR,然后将阳性克隆摇菌提质粒做酶切鉴定。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-12-31 15:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leunglm

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 彬心玉壶 at 2009-12-31 07:25:
克隆后筛选的时候第一轮先不用提质粒吧，最好用载体引物可以做个菌落PCR先验证一下，这样验证会好很多。

再就是测序貌似可以直接送纯菌落吧，如果你的载体是常用的载体，那些引物测序公司都有，让他们用载体引 ...

同意！！
回复此楼
8楼2009-12-31 15:30:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yangym1123 at 2009-12-31 08:49:
一般我们都是用菌液PCR用自己的特异引物来验证的，有一定的假阳性率，我做了三年也就出来一两个假阳性吧，整理提取后酶切验证时最好的办法，如果切下来你的目的条带，说明载体上肯定有你的插入片段啊，另外提取的 ...

曾经见过菌液PCR好处的相关描述，可是给实验室的同志建议以后仍然用菌落PCR。请问您能否把菌液PCR的好处和操作方法指点一下，不胜感激。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-12-31 16:59:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
赞一下
10楼2009-12-31 17:47:26
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 wordsworth3180 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭