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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

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虫号: 568607
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性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[交流] 【求助/交流】质粒pcr假阳性问题

请问大家，筛选重组克隆时，用碱裂解法提取转化子的质粒，然后用提取的质粒做模板进行pcr验证。虽然提取的质粒有时弥散，但pcr为阳性，这种情况下，请问虫虫们，假阳性的概率多大？
因为测序需要自己设计引物，所以想有把握了再测序，希望大家给分析一下！
多谢了！

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1楼 2009-12-30 20:03:10

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linxi8579

铜虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 620942
注册: 2008-10-09
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by yangym1123 at 2009-12-31 08:49:
一般我们都是用菌液PCR用自己的特异引物来验证的，有一定的假阳性率，我做了三年也就出来一两个假阳性吧，整理提取后酶切验证时最好的办法，如果切下来你的目的条带，说明载体上肯定有你的插入片段啊，另外提取的 ...

曾经见过菌液PCR好处的相关描述，可是给实验室的同志建议以后仍然用菌落PCR。请问您能否把菌液PCR的好处和操作方法指点一下，不胜感激。