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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒pcr假阳性问题
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caoliang38

铁虫 (小有名气)
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建议楼主不要用PCR来检验，你首先就要排除空载体是否可以P出条带，这样就比较麻烦，酶切是比较令人信服的实验手段。按照楼主的言辞推测，老板是不是经费没有周转过来？
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11楼2009-12-31 18:01:16
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
革兰氏阳性菌是不是这种方法多煮一会儿就行？ 感觉质粒pcr更保险采用的这种方法，可是提的质粒总是不好。
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12楼2010-01-01 09:20:15
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by 彬心玉壶 at 2009-12-31 17:47:



挑单菌落于装有20微升谁的PCR管中，如果是用牙签的话，不要把牙签一直放在里面，因为时间长了，牙签要把水吸干。若用10微升的白色小枪头，可讲枪量程调小，挑菌落后在PCR管的20微升水中吹打几次，把枪头打在 ...

非常感谢您的回复。我想以后我会试一下的。请问这样的好处是不是PCR验证后可以直接取那剩下的18微升菌液摇菌。但是如果不用这种菌液RCR，挑菌落PCR验证成功后再去平板里挑原菌落做PCR，菌液PCR好在哪里啊？
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13楼2010-01-09 22:26:22
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匿名

用户注销 (著名写手)
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14楼2010-01-10 14:58:02
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by 彬心玉壶 at 2010-1-10 14:58:



好在不用提DNA或者质粒，节约时间，先可以大致筛选一遍。

要是你先挑菌落做菌落PCR验证了，在去平板挑原菌落做PCR或者摇菌的，第一你要先标记号位置，其次一般经过9~12个小时的培养，菌落没有那么大吧， ...

我们的方法是可以挑第二次的，就是在平板上画格子，然后一个格子里用枪头画三条，长出来不是单菌落啊，可以挑好多次的。不过用菌液PCR也许更均匀更利于定量吧。
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15楼2010-01-14 16:37:32
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