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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒pcr假阳性问题
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒pcr假阳性问题

请问大家，筛选重组克隆时，用碱裂解法提取转化子的质粒，然后用提取的质粒做模板进行pcr验证。虽然提取的质粒有时弥散，但pcr为阳性，这种情况下，请问虫虫们，假阳性的概率多大？
因为测序需要自己设计引物，所以想有把握了再测序，希望大家给分析一下！
多谢了！
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1楼 2009-12-30 20:03:10
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 彬心玉壶 at 2009-12-31 17:47:



挑单菌落于装有20微升谁的PCR管中，如果是用牙签的话，不要把牙签一直放在里面，因为时间长了，牙签要把水吸干。若用10微升的白色小枪头，可讲枪量程调小，挑菌落后在PCR管的20微升水中吹打几次，把枪头打在 ...

非常感谢您的回复。我想以后我会试一下的。请问这样的好处是不是PCR验证后可以直接取那剩下的18微升菌液摇菌。但是如果不用这种菌液RCR，挑菌落PCR验证成功后再去平板里挑原菌落做PCR，菌液PCR好在哪里啊？
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13楼2010-01-09 22:26:22
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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2楼2009-12-31 07:21:05
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匿名

用户注销 (著名写手)
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3楼2009-12-31 07:25:21
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般我们都是用菌液PCR用自己的特异引物来验证的，有一定的假阳性率，我做了三年也就出来一两个假阳性吧，整理提取后酶切验证时最好的办法，如果切下来你的目的条带，说明载体上肯定有你的插入片段啊，另外提取的质粒弥散可能是因为有蛋白（DNA酶的污染），再重提就是啦！
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4楼2009-12-31 08:49:36
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