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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

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专业: 微生物生理与生物化学

[交流] 【求助/交流】质粒pcr假阳性问题

请问大家，筛选重组克隆时，用碱裂解法提取转化子的质粒，然后用提取的质粒做模板进行pcr验证。虽然提取的质粒有时弥散，但pcr为阳性，这种情况下，请问虫虫们，假阳性的概率多大？
因为测序需要自己设计引物，所以想有把握了再测序，希望大家给分析一下！
多谢了！

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1楼2009-12-30 20:03:10

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linxi8579

铜虫 (正式写手)

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性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by 彬心玉壶 at 2010-1-10 14:58:

好在不用提DNA或者质粒，节约时间，先可以大致筛选一遍。

要是你先挑菌落做菌落PCR验证了，在去平板挑原菌落做PCR或者摇菌的，第一你要先标记号位置，其次一般经过9~12个小时的培养，菌落没有那么大吧， ...

我们的方法是可以挑第二次的，就是在平板上画格子，然后一个格子里用枪头画三条，长出来不是单菌落啊，可以挑好多次的。不过用菌液PCR也许更均匀更利于定量吧。