24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 748  |  回复: 14
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒pcr假阳性问题

请问大家,筛选重组克隆时,用碱裂解法提取转化子的质粒,然后用提取的质粒做模板进行pcr验证。虽然提取的质粒有时弥散,但pcr为阳性,这种情况下,请问虫虫们,假阳性的概率多大?
因为测序需要自己设计引物,所以想有把握了再测序,希望大家给分析一下!
多谢了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)

革兰氏阳性菌是不是这种方法多煮一会儿就行? 感觉质粒pcr更保险采用的这种方法,可是提的质粒总是不好。
12楼2010-01-01 09:20:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

匿名

用户注销 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
2楼2009-12-31 07:21:05
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
3楼2009-12-31 07:25:21
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

yangym1123

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般我们都是用菌液PCR用自己的特异引物来验证的,有一定的假阳性率,我做了三年也就出来一两个假阳性吧,整理提取后酶切验证时最好的办法,如果切下来你的目的条带,说明载体上肯定有你的插入片段啊,另外提取的质粒弥散可能是因为有蛋白(DNA酶的污染),再重提就是啦!
4楼2009-12-31 08:49:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见