| 查看: 577 | 回复: 7 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
358219418金虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】请教高手，谢谢
|
||
|
我做的基因编码的氨基酸N端有信号肽，预测蛋白分子量68kD。构建的重组质粒为peT-32-a重组质粒，转入BL21后提质粒，PCR和双酶切鉴定都没问题。 将重组菌37度摇床培养，5小时后加IPTG终浓度0.1mM，诱导5小时后取1mL离心，弃上清，加PBS，加上样buffer,100度，3分钟，离心后加样跑SDS-PAGE。染色脱色后没有目的蛋白，什么原因。 麻烦高手指点，十分感谢哈！ |
回复此楼» 猜你喜欢
关于代码变化问题，想知道的进来
已经有20人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有11人回复
-
这样的filecode谁见过
已经有21人回复
-
filecode与中标关系的预测
已经有5人回复
-
fileCode有新解读？
已经有18人回复
-
关于filecode，很负责任的告诉大家
已经有7人回复
-
【2027博士申请】纳米药物递送方向
已经有5人回复
-
关于豆爷回答的JTJC与%2F数量
已经有7人回复
-
2026国自然放榜时间
已经有3人回复
-
国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
thinka
铜虫 (著名写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2614.5
- 散金: 170
- 红花: 8
- 帖子: 2781
- 在线: 112.8小时
- 虫号: 916724
- 注册: 2009-11-30
- 专业: 老年医学
4楼2009-12-29 17:11:08
忘记将来
木虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 2511.3
- 散金: 506
- 红花: 2
- 帖子: 473
- 在线: 232.9小时
- 虫号: 815220
- 注册: 2009-07-24
- 专业: 生物化学
2楼2009-12-29 16:08:10
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5,VIP+0): 12-29 19:29
358219418(金币+2,VIP+0):谢谢你的意见！考虑的很全面，只是前三个都排除了，第四个原因：我用的是我们实验室常用的浓度，也许要改变一下吧 12-30 10:24
amisking(金币+5,VIP+0): 12-29 19:29
358219418(金币+2,VIP+0):谢谢你的意见！考虑的很全面，只是前三个都排除了，第四个原因：我用的是我们实验室常用的浓度，也许要改变一下吧 12-30 10:24
|
有几个问题： 1.pet32a有trx基因，你是不是做的融合表达，确定目的蛋白大小 2.信号肽没有作用且会影响原核表达，应该去掉 3.稀有碱基含量多不多，可以换用能表达稀有碱基的菌株 4.诱导条件需要摸索，比如起始诱导时od600最好在0.5-0.8之间，你实验中“重组菌37度摇床培养，5小时后加IPTG”可能不合适，还有诱导表达最好从IPTG终浓度1mM开始，不建议从0.1mM开始试验 |
3楼2009-12-29 17:00:32
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MicEPI: 114
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19788.2
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6619
- 在线: 2793.4小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
5楼2009-12-30 00:22:45
20