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358219418

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教高手,谢谢

我做的基因编码的氨基酸N端有信号肽,预测蛋白分子量68kD。构建的重组质粒为peT-32-a重组质粒,转入BL21后提质粒,PCR和双酶切鉴定都没问题。
    将重组菌37度摇床培养,5小时后加IPTG终浓度0.1mM,诱导5小时后取1mL离心,弃上清,加PBS,加上样buffer,100度,3分钟,离心后加样跑SDS-PAGE。染色脱色后没有目的蛋白,什么原因。

麻烦高手指点,十分感谢哈!
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木虫,快乐并坚强着
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忘记将来

木虫 (正式写手)

貌似根本就没有表达,做一个高IPTG高温和低IPTG低温的实验,基本上就可以判断他有没有表达了。
2楼2009-12-29 16:08:10
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