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358219418

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教高手,谢谢

我做的基因编码的氨基酸N端有信号肽,预测蛋白分子量68kD。构建的重组质粒为peT-32-a重组质粒,转入BL21后提质粒,PCR和双酶切鉴定都没问题。
    将重组菌37度摇床培养,5小时后加IPTG终浓度0.1mM,诱导5小时后取1mL离心,弃上清,加PBS,加上样buffer,100度,3分钟,离心后加样跑SDS-PAGE。染色脱色后没有目的蛋白,什么原因。

麻烦高手指点,十分感谢哈!
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木虫,快乐并坚强着
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

不好意思,我弱弱的问一下,蛋白质变性之后在你的离心条件下是上清还是沉淀?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2009-12-30 00:22:45
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