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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】关于FLD检测器的影响因素
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thunderay

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于FLD检测器的影响因素

最近刚刚开始接触FLD，因为正好需要用FLD来做一个大鼠的血浆样品分析，这周先用溶液试了一下，发现到100ng/ml的时候就很那检测出来，想请教一下熟悉FLD检测器的战友，一般流动相中的什么部分容易对检测信号造成影响呢？我用的乙酸铵和乙腈的流动相，也有人推荐水相为乙酸或者磷酸，这些有什么影响呢？我用的检测波长是230~280
传说FLD可以做到0.1ng，也有不少paper的LLOQ达到1ng/ml，发现好难好难。。。
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1楼 2009-12-23 09:33:09
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tianxue.1202

银虫 (小有名气)
★
狼狼晴空(金币+1,VIP+0):多谢交流 12-23 20:22
我们用的是乙腈的，楼主可以到网上搜看看啊，应该会有收获的
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2楼2009-12-23 12:28:47
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ddw888

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
狼狼晴空(金币+2,VIP+0):感谢交流 12-23 20:22
thunderay(金币+3,VIP+0): 12-23 22:02
1.你的样品本身荧光强吗，谁说荧光灵敏度一定高。
2.波长有无扫描
3.注意流动相对荧光造成淬灭，但通常情况不会
4.pH的影响较大
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3楼2009-12-23 13:55:53
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thunderay

铁杆木虫 (小有名气)
样品有荧光吸收的，不少文献报道也是用的荧光，是不是因为220到280的波长太短导致基线容易不平？发现跑很久也跑不平啊。。。
因为有相关参考文献(SCI)做到1ng/ml，但是我100ng做起来也很困难，主要是基线不平。。。波动在0.3-0.7LU之间。。。感觉实在太大了。。。
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4楼2009-12-23 15:28:07
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y_0622

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
狼狼晴空(金币+2,VIP+0):感谢交流 12-23 20:22
472514568(金币+1,VIP+0):谢谢回帖！ 12-23 21:58
thunderay(金币+5,VIP+0): 12-23 22:01
我的感觉：使用荧光或者电化学要求试剂纯度比较重要，血样本身样本基线就不易稳定，这与提取方法有很大关系，如果直接溶剂溶解离心进样往往干扰很多，这时候最好提取一下，至于为什么别人的文献检测灵敏度那么高，而你的很低，排除其他因素，估计是与试剂、仪器有关，在泵与检测器、试剂方面确实国外的比较好，信噪比如果按3/1算的话，看看你的最低检测限是多少，这种超过文献100倍的条件，不出意外应该是检测条件不同引起的（特别是流动相与荧光结合试剂不同）
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5楼2009-12-23 16:51:51
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thunderay

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by y_0622 at 2009-12-23 16:51:
这种超过文献100倍的条件，不出意外应该是检测条件不同引起的（特别是流动相与荧光结合试剂不同）

呃，可否详细说一下这句话的意思？检测条件基本设置的是一样的啊，没有用到荧光结合试剂。。。

不过我发现一个问题，会不会可能是因为220nm，280nm的波长容易引起基线噪音过大？因为我尝试了一下流动相即时走纯的乙腈，也会有不小的噪音，0.1-0.16LU左右，而换成300nm，500nm的设置的时候，则噪音就很小很小了。。
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6楼2009-12-23 21:05:01
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y_0622

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
thunderay(金币+5,VIP+0): 12-25 14:22
引用回帖:
Originally posted by thunderay at 2009-12-23 21:05:


呃，可否详细说一下这句话的意思？检测条件基本设置的是一样的啊，没有用到荧光结合试剂。。。

不过我发现一个问题，会不会可能是因为220nm，280nm的波长容易引起基线噪音过大？因为我尝试了一下流动相即时 ...

检测条件一样，而检测效果不一样，可能该色谱没做过普适实验，怀疑该色谱条件室间差异较大，首先确定下泵、柱子、检测器、流动相条件是否与文献色谱条件一致（最好厂家一致），其次如果怀疑流动相干扰，换进口试剂比较一下，没有别的方法，只有一步一步排除，做过几个荧光方面的检测，从没出现检测限差距这么大、基线跑不稳的情况，倒是电化学有这种情况。另外如果不影响实验，调低灵敏度能使基线变平。

[ Last edited by y_0622 on 2009-12-30 at 09:03 ]
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7楼2009-12-25 09:36:39
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thunderay

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by y_0622 at 2009-12-25 09:36:

检测条件一样，而检测效果不一样，可能该色谱没做过普适实验，怀疑该色谱条件室间差异较大，首先确定下泵、柱子、检测器、流动相条件是否与文献色谱条件一致（最好厂家一致），其次如果怀疑流动相干扰，换进口试 ...

现在的主要问题是，在低波长下，即时不走流动相，不上柱子，也会基线不平，有0.2LU左右的波动。。。而换成高波长，比如300nm的激发波长，就没有任何问题。。。
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8楼2009-12-25 14:23:30
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