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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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thunderay

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于FLD检测器的影响因素

最近刚刚开始接触FLD,因为正好需要用FLD来做一个大鼠的血浆样品分析,这周先用溶液试了一下,发现到100ng/ml的时候就很那检测出来,想请教一下熟悉FLD检测器的战友,一般流动相中的什么部分容易对检测信号造成影响呢?我用的乙酸铵和乙腈的流动相,也有人推荐水相为乙酸或者磷酸,这些有什么影响呢?我用的检测波长是230~280
传说FLD可以做到0.1ng,也有不少paper的LLOQ达到1ng/ml,发现好难好难。。。
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tianxue.1202

银虫 (小有名气)


狼狼晴空(金币+1,VIP+0):多谢交流 12-23 20:22
我们用的是乙腈的,楼主可以到网上搜看看啊,应该会有收获的
2楼2009-12-23 12:28:47
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ddw888

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
狼狼晴空(金币+2,VIP+0):感谢交流 12-23 20:22
thunderay(金币+3,VIP+0): 12-23 22:02
1.你的样品本身荧光强吗,谁说荧光灵敏度一定高。
2.波长有无扫描
3.注意流动相对荧光造成淬灭,但通常情况不会
4.pH的影响较大
3楼2009-12-23 13:55:53
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thunderay

铁杆木虫 (小有名气)

样品有荧光吸收的,不少文献报道也是用的荧光,是不是因为220到280的波长太短导致基线容易不平?发现跑很久也跑不平啊。。。
因为有相关参考文献(SCI)做到1ng/ml,但是我100ng做起来也很困难,主要是基线不平。。。波动在0.3-0.7LU之间。。。感觉实在太大了。。。
4楼2009-12-23 15:28:07
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y_0622

金虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
狼狼晴空(金币+2,VIP+0):感谢交流 12-23 20:22
472514568(金币+1,VIP+0):谢谢回帖! 12-23 21:58
thunderay(金币+5,VIP+0): 12-23 22:01
我的感觉:使用荧光或者电化学要求试剂纯度比较重要,血样本身样本基线就不易稳定,这与提取方法有很大关系,如果直接溶剂溶解离心进样往往干扰很多,这时候最好提取一下,至于为什么别人的文献检测灵敏度那么高,而你的很低,排除其他因素,估计是与试剂、仪器有关,在泵与检测器、试剂方面确实国外的比较好,信噪比如果按3/1算的话,看看你的最低检测限是多少,这种超过文献100倍的条件,不出意外应该是检测条件不同引起的(特别是流动相与荧光结合试剂不同)
5楼2009-12-23 16:51:51
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thunderay

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by y_0622 at 2009-12-23 16:51:
这种超过文献100倍的条件,不出意外应该是检测条件不同引起的(特别是流动相与荧光结合试剂不同)

呃,可否详细说一下这句话的意思?检测条件基本设置的是一样的啊,没有用到荧光结合试剂。。。

不过我发现一个问题,会不会可能是因为220nm,280nm的波长容易引起基线噪音过大?因为我尝试了一下流动相即时走纯的乙腈,也会有不小的噪音,0.1-0.16LU左右,而换成300nm,500nm的设置的时候,则噪音就很小很小了。。
6楼2009-12-23 21:05:01
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y_0622

金虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
thunderay(金币+5,VIP+0): 12-25 14:22
引用回帖:
Originally posted by thunderay at 2009-12-23 21:05:


呃,可否详细说一下这句话的意思?检测条件基本设置的是一样的啊,没有用到荧光结合试剂。。。

不过我发现一个问题,会不会可能是因为220nm,280nm的波长容易引起基线噪音过大?因为我尝试了一下流动相即时 ...

检测条件一样,而检测效果不一样,可能该色谱没做过普适实验,怀疑该色谱条件室间差异较大,首先确定下泵、柱子、检测器、流动相条件是否与文献色谱条件一致(最好厂家一致),其次如果怀疑流动相干扰,换进口试剂比较一下,没有别的方法,只有一步一步排除,做过几个荧光方面的检测,从没出现检测限差距这么大、基线跑不稳的情况,倒是电化学有这种情况。另外如果不影响实验,调低灵敏度能使基线变平。

[ Last edited by y_0622 on 2009-12-30 at 09:03 ]
7楼2009-12-25 09:36:39
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thunderay

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by y_0622 at 2009-12-25 09:36:

检测条件一样,而检测效果不一样,可能该色谱没做过普适实验,怀疑该色谱条件室间差异较大,首先确定下泵、柱子、检测器、流动相条件是否与文献色谱条件一致(最好厂家一致),其次如果怀疑流动相干扰,换进口试 ...

现在的主要问题是,在低波长下,即时不走流动相,不上柱子,也会基线不平,有0.2LU左右的波动。。。而换成高波长,比如300nm的激发波长,就没有任何问题。。。
8楼2009-12-25 14:23:30
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