| 查看: 850 | 回复: 15 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
runxiaoli木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】关于3'RACE的很奇怪的现象，求助大家乐
|
||
|
各位同仁： 你们好。 最近我在做3‘race。可是遇到的问题让我觉得很奇怪。 我已经拿到了中间片段，设计了4个上游引物来进行pcr，都跑出带了，送出去测序，也都扩到了polyA，可是blast还不是我要的基因。我想问一下这是什么原因。是不是和我换了模板有关系，第一次做的时候，用的是SA处理后的模板，第二次用的则是NACL处理的，但是做中间片段的时候，跑出的带是一致的。 很奇怪出现这个问题，不知道各位同仁有什么好的建议没有。 希望大家给我出谋划策，不胜感激。 祝大家快乐，身体健康，一切顺利。  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有114人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
hugang2004_2000
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2022
- 散金: 325
- 红花: 2
- 帖子: 671
- 在线: 201.5小时
- 虫号: 263575
- 注册: 2006-07-02
- 性别: GG
- 专业: 植物学
★
runxiaoli(金币+1,VIP+0):非常感激。 12-15 19:49
runxiaoli(金币+1,VIP+0):非常感激。 12-15 19:49
| 补充一点点，做RACE的时候要注意扩增出来的片段大小，是不是和你预期的大小相似。UTR区域，大概加100个左右碱基吧。所以，你找到你的片段还有多长需要扩增，计算从引物到终止密码子的碱基数，加个50-100左右就是你应该得到的片段大小。如果得到了不同基因也要看看这个不是目的基因的基因是不是有用，毕竟得到一个新基因不容易，钱也花进去了，就要得到点结果的，多费点心思，不是坏事。在扩增中间片段的时候，即使得到的条带貌似一个单一条带，在链接到T载体后也要挑不同的克隆，用T载体通用引物做PCR看看，可能得到的条带会有点差别，这在克隆家族基因的isomer时有时会同时得到几个目的基因，这样的话，一下子得到好几个家族基因，对于后续实验质量，文章发表可以有质的提高。 |
13楼2009-12-15 12:36:00
runxiaoli
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1832.1
- 散金: 1035
- 红花: 2
- 帖子: 301
- 在线: 260.8小时
- 虫号: 708185
- 注册: 2009-02-25
- 专业: 果树学
2楼2009-12-14 21:16:28
won7
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 954
- 散金: 55
- 帖子: 297
- 在线: 61.2小时
- 虫号: 19911
- 注册: 2003-07-30
- 性别: GG
- 专业: 水产资源与保护学
3楼2009-12-14 22:15:51
hugang2004_2000
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2022
- 散金: 325
- 红花: 2
- 帖子: 671
- 在线: 201.5小时
- 虫号: 263575
- 注册: 2006-07-02
- 性别: GG
- 专业: 植物学
4楼2009-12-14 22:54:00
10