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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于DNA的提取纯化的问题
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兜兜1280

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于DNA的提取纯化的问题

各位，我提取的DNA是要做southern用，提的是甘蓝的DNA
我用的是CTAB法，但是OD260/280比值总是在2.2之外，而且浓度也不高
1）哪位能给我个比较详细具体的方法，能够得到纯度高的DNA
2）DNA的纯度是怎么检测的，标准是什么，OD260nm/280nm 260/230nm 要在什么范围才达到标准



麻烦各位能发个详细的步骤给我  最好是有电子版的直接发我邮箱里  不甚感激sugarain@126.com
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1楼 2009-12-13 17:46:34
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 12-13 20:16
兜兜1280(金币+2,VIP+0): 12-14 20:21
建议 用试剂盒，现在都已经很便宜了。

自己 瞎琢磨，有种闭门造车 的感觉。

不过道理还是要搞明白，普通的分子生物学书，实验操作手册都已经 说的很清楚了。

[ Last edited by hihoney on 2009-12-13 at 17:50 ]
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2楼2009-12-13 17:48:33
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jlzkchong

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 12-13 20:16
兜兜1280(金币+1,VIP+0): 12-17 08:55
不知道你的CTAB法事用氯仿异戊醇抽提几次？！我们抽提两次，吸取上清液的时候不要把中间液面的蛋白成分过多的吸上去，枪头的吸力太大的话，可以把枪头的尖端部分稍微剪去一些，这样再吸取上清液的时候可以减少液面的剪切力，我们提取的DNA最终260/280都在1.8-2.0之间，还算比较理想的~希望对你有帮助~
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3楼2009-12-13 19:19:52
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jlzkchong at 2009-12-13 19:19:
不知道你的CTAB法事用氯仿异戊醇抽提几次？！我们抽提两次，吸取上清液的时候不要把中间液面的蛋白成分过多的吸上去，枪头的吸力太大的话，可以把枪头的尖端部分稍微剪去一些，这样再吸取上清液的时候可以减少液面 ...

你好！我提植物的基因组也是OD260/280比值也在2.0以外，能麻烦把你的方法告诉我下？基因组效果不好，会影响PCR效果，非常感谢
我的邮箱：hwj_0919@126.com
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4楼2009-12-16 15:04:28
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松上云雀

木虫 (正式写手)
可以到学术期刊网查找别人的硕士或博士论文，上边有详细的protocol。
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5楼2009-12-16 16:18:46
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fenweiking

新虫 (初入文坛)
★
兜兜1280(金币+1,VIP+0): 12-17 08:56
用酒精抽提，很简单的，醋酸钠，酒精，70%的酒精，两个小时而已
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6楼2009-12-16 20:47:59
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apple-z

银虫 (小有名气)
★
兜兜1280(金币+1,VIP+0): 12-17 08:56
要想比较快捷方便的提取纯度较高的DNA还是用试剂盒比较好。
检测纯度时一般认为260/280为1.8左右最佳。太高了有RNA污染，太低了有蛋白污染。
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7楼2009-12-16 22:43:49
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jlzkchong

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jlzkchong at 2009-12-13 19:19:
不知道你的CTAB法事用氯仿异戊醇抽提几次？！我们抽提两次，吸取上清液的时候不要把中间液面的蛋白成分过多的吸上去，枪头的吸力太大的话，可以把枪头的尖端部分稍微剪去一些，这样再吸取上清液的时候可以减少液面 ...

不好意思，最近比较忙。没怎么登陆这里，我现在的实验方法是手抄版的，等过两天时间充足了，我给你找找电子版的吧，这两天实在没有时间~
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8楼2009-12-18 09:38:42
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yeyw04

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
多看文献，这个应该比较好解决的啊
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9楼2009-12-25 12:51:06
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你看下分子克隆啊，酚氯仿抽提去除蛋白最有效，不要单独使用氯仿抽提，去除RNA要用RNA酶消化
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-12-25 14:01:11
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