24小时热门版块排行榜

返回列表

当前主题已经存档。

[交流] 【交流/求助】克隆基因全长问题2

我对一个已知基因序列进行全长克隆，测序后结果得到的序列只是已知序列的前一部分，全长有1400多bp，但我做出来的只有前面的大概800多bp，请问这是什么原因？
实验过程中电泳结果都挺好的，酶切结果也是对的，测序后就不行了，是不是失败了？
谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-12-12 at 21:47 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景已经有0人回复
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有143人回复
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析已经有1人回复
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展已经有0人回复
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍已经有0人回复
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner 已经有0人回复
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner 已经有0人回复
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner 已经有0人回复
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner 已经有0人回复
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂已经有0人回复

1楼 2009-12-02 11:09:43

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lboo7

银虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 325.2
散金: 366
红花: 2
帖子: 136
在线: 89.8小时
虫号: 722350
注册: 2009-03-14
性别: GG
专业: 生物化学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 12-2 11:36

你可以设计多段引物克隆片段，然后载拼接在一起就可以了。

赞一下(11人)

回复此楼

2楼2009-12-02 11:29:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 1977.1
散金: 3
红花: 2
帖子: 489
在线: 58.1小时
虫号: 481076
注册: 2007-12-17
性别: GG
专业: 植物生理与生化

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-2 12:32

做全长是不是应该用RACE啊，5‘ 3’分开做。

楼主的意思是你PCR出来的片段是1400bp测序出来只有700？这个不太可能吧？你连进T载后有没有做一下酶切验证？

PS:一个测序反应的有效读长大概只有700-800BP，1400bp需要正相反相两个反应才能测通。
NCBI上的很多预测序列很多都是不准的，我师兄做过一个基因，实际扩出来的就比NCBI上的短很多，后来发现预测序列里多了一段内含子。

赞一下(21人)

回复此楼

3楼2009-12-02 12:16:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖