24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 638  |  回复: 5
当前主题已经存档。

llzhang2012

[交流] 【交流/求助】克隆基因全长问题2

我对一个已知基因序列进行全长克隆,测序后结果得到的序列只是已知序列的前一部分,全长有1400多bp,但我做出来的只有前面的大概800多bp,请问这是什么原因?
   实验过程中电泳结果都挺好的,酶切结果也是对的,测序后就不行了,是不是失败了?
   谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-12-12 at 21:47 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lboo7

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 12-2 11:36
你可以设计多段引物克隆片段,然后载拼接在一起就可以了。
2楼2009-12-02 11:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-2 12:32
做全长是不是应该用RACE啊,5‘ 3’分开做。

楼主的意思是你PCR出来的片段是1400bp测序出来只有700?这个不太可能吧?你连进T载后有没有做一下酶切验证?

PS:一个测序反应的有效读长大概只有700-800BP,1400bp需要正相反相两个反应才能测通。
NCBI上的很多预测序列很多都是不准的,我师兄做过一个基因,实际扩出来的就比NCBI上的短很多,后来发现预测序列里多了一段内含子。
3楼2009-12-02 12:16:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

用primer walking技术啊
4楼2009-12-02 16:43:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

要测两个反应。
5楼2009-12-02 18:09:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yueranwoxin

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你测了几个反应啊,一个反应大概只能测七八百个碱基,要加一个反应
6楼2009-12-12 21:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 llzhang2012 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿沪9,326求生物学调剂 +10 刘墨墨 2026-04-13 10/500 2026-04-14 15:16 by zs92450
[考研] 284求调剂 +17 让我上岸吧阿西 2026-04-09 17/850 2026-04-14 14:44 by 不我拉绿卡
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 考研二轮调剂 +10 故人?? 2026-04-09 10/500 2026-04-13 09:55 by szhize
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-09 12/600 2026-04-12 10:32 by 逆水乘风
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-08 9/450 2026-04-12 02:24 by 秋豆菜芽
[考研] 280求调剂 +7 兮兮夜夜 2026-04-09 10/500 2026-04-12 00:33 by 蓝云思雨
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +7 0856?调剂 2026-04-10 7/350 2026-04-11 21:33 by 蓝云思雨
[考研] 本人女孩 +7 吼吼, 2026-04-10 9/450 2026-04-11 14:45 by ACS Nano——
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
信息提示
请填处理意见