24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 632  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

llzhang2012

[交流] 【交流/求助】克隆基因全长问题2

我对一个已知基因序列进行全长克隆,测序后结果得到的序列只是已知序列的前一部分,全长有1400多bp,但我做出来的只有前面的大概800多bp,请问这是什么原因?
   实验过程中电泳结果都挺好的,酶切结果也是对的,测序后就不行了,是不是失败了?
   谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-12-12 at 21:47 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

用primer walking技术啊
4楼2009-12-02 16:43:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lboo7

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 12-2 11:36
你可以设计多段引物克隆片段,然后载拼接在一起就可以了。
2楼2009-12-02 11:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 12-2 12:32
做全长是不是应该用RACE啊,5‘ 3’分开做。

楼主的意思是你PCR出来的片段是1400bp测序出来只有700?这个不太可能吧?你连进T载后有没有做一下酶切验证?

PS:一个测序反应的有效读长大概只有700-800BP,1400bp需要正相反相两个反应才能测通。
NCBI上的很多预测序列很多都是不准的,我师兄做过一个基因,实际扩出来的就比NCBI上的短很多,后来发现预测序列里多了一段内含子。
3楼2009-12-02 12:16:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yueranwoxin

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你测了几个反应啊,一个反应大概只能测七八百个碱基,要加一个反应
6楼2009-12-12 21:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +8 李木子啊哈哈 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:55 by 李木子啊哈哈
[考研] 312求调剂 +6 李鸿飞飞 2026-04-06 6/300 2026-04-12 00:34 by 蓝云思雨
[考研] 22专硕求调剂 +6 haoyun上岸 2026-04-11 8/400 2026-04-11 23:21 by labixiaoqiao
[考研] 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 8/400 2026-04-11 20:25 by 蓝云思雨
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-06 10/500 2026-04-11 10:36 by 紫曦紫棋
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +11 LZH(等待调剂中 2026-04-10 11/550 2026-04-11 08:39 by zhq0425
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 一志愿京区985,085401,与本科专业一致,电子信息工程, +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 一志愿中科院105500专业总分315求调剂 +6 lallalh 2026-04-09 7/350 2026-04-09 17:51 by lallalh
[考研] 材料299专硕求调剂 +10 +21 2026-04-09 10/500 2026-04-09 17:34 by 1753564080
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 一志愿华南师范大学0702物理学305调剂 +4 念常安 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:53 by bljnqdcc
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 材料调剂 +13 汉123456 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:53 by 来看流星雨10
[考研] 259求调剂 +5 就爱吃土豆呀呀 2026-04-07 5/250 2026-04-07 22:40 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见