24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 859  |  回复: 6
当前主题已经存档。

jia901

铜虫 (小有名气)

[交流] 定量PCR的溶解曲线问题

前些天实验时候,发现样品的溶解曲线俩峰。于是变了下升温程序,结果反而标准样溶解曲线一直有俩峰,而且浓度越低,小点的峰就越高。样品反而只有一个峰,而且标准样的峰跟样品的不太重合。升高了2度退火温度,发现不起作用,片段长度600多。

高手们支个招啊。怎么个情况啊,如果优化的话优化哪些指标啊。
见图。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jianandy

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
小峰应该是引物二聚体,推荐降低反应体系中的引物浓度
2楼2009-11-14 19:56:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jianandy

金虫 (著名写手)

不过不清楚你的标准样跟样品的区别
3楼2009-11-14 19:58:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjlbest

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做定量PCR片段大小是600多。是不是太大了?合适吗?从峰的位置看好像不是二聚体,应该是非特异性条带,你可以跑个电泳看看,建议重新设计引物。
4楼2009-11-14 20:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia901

铜虫 (小有名气)

引物都是文献上的啊,不是我自己设计的。
跑电泳有轻微的二聚体,而且溶解的温度看的话也不像是引物二聚体。
非特异性的条带也没有。看看电泳图,前面4个是标线的样品。
5楼2009-11-14 20:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

六妖妖

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lz查文献得到的引物是用来做SYBR的还是做探针的?SYBR的话最好还是400bp以内比较好。从你的电泳图来看,明显有非特异扩增,而且是大片段产物。最根本的解决方法是重新设计引物。实在不愿意重新设计引物就试试温度梯度筛选一个比较好的退火温度。
6楼2009-11-14 22:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia901

铜虫 (小有名气)

非特异扩增很明显么?难道是图片的分辨率问题?不过我不太清楚,定量的PCR仪器上是否能做梯度的?从新设计引物的话工作量大了就。不过还是感谢各位了。
7楼2009-11-14 22:42:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jia901 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 pmo95bazuy 2026-05-23 7/350 2026-05-24 06:35 by fpo5ljpv91
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 7/350 2026-05-23 23:01 by L135790
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 7/350 2026-05-23 16:57 by articlefan
[基金申请] 揭秘青基评审内幕:几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路! +3 zju2000 2026-05-21 4/200 2026-05-23 08:33 by xli1984
[基金申请] 今年审到国自然15份,谈谈感受 +27 国自然国社科中 2026-05-17 28/1400 2026-05-22 16:25 by hunter无悔
[论文投稿] 投稿求助,期刊 +4 希冀,有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀,有书读
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 13/650 2026-05-21 20:15 by 呀呀好傻
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +4 光伏爱好者 2026-05-17 6/300 2026-05-21 01:37 by 17520222914
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博,可以边工作边读全日制嘛? 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
信息提示
请填处理意见