24小时热门版块排行榜    

查看: 910  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jia901

铜虫 (小有名气)

[交流] 定量PCR的溶解曲线问题

前些天实验时候,发现样品的溶解曲线俩峰。于是变了下升温程序,结果反而标准样溶解曲线一直有俩峰,而且浓度越低,小点的峰就越高。样品反而只有一个峰,而且标准样的峰跟样品的不太重合。升高了2度退火温度,发现不起作用,片段长度600多。

高手们支个招啊。怎么个情况啊,如果优化的话优化哪些指标啊。
见图。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jianandy

金虫 (著名写手)

不过不清楚你的标准样跟样品的区别
3楼2009-11-14 19:58:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

jianandy

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
小峰应该是引物二聚体,推荐降低反应体系中的引物浓度
2楼2009-11-14 19:56:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjlbest

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做定量PCR片段大小是600多。是不是太大了?合适吗?从峰的位置看好像不是二聚体,应该是非特异性条带,你可以跑个电泳看看,建议重新设计引物。
4楼2009-11-14 20:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia901

铜虫 (小有名气)

引物都是文献上的啊,不是我自己设计的。
跑电泳有轻微的二聚体,而且溶解的温度看的话也不像是引物二聚体。
非特异性的条带也没有。看看电泳图,前面4个是标线的样品。
5楼2009-11-14 20:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +21 医学老男孩 2026-08-13 46/2300 2026-08-14 16:44 by ttzzttzz01
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +3 Tide man 2026-08-14 4/200 2026-08-14 16:33 by Yeuchan
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +5 启萌科技 2026-08-12 16/800 2026-08-14 16:02 by 启萌科技
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +4 Ldrop2023 2026-08-13 4/200 2026-08-14 14:50 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见