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jia901

铜虫 (小有名气)

[交流] 定量PCR的溶解曲线问题

前些天实验时候,发现样品的溶解曲线俩峰。于是变了下升温程序,结果反而标准样溶解曲线一直有俩峰,而且浓度越低,小点的峰就越高。样品反而只有一个峰,而且标准样的峰跟样品的不太重合。升高了2度退火温度,发现不起作用,片段长度600多。

高手们支个招啊。怎么个情况啊,如果优化的话优化哪些指标啊。
见图。
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jjlbest

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做定量PCR片段大小是600多。是不是太大了?合适吗?从峰的位置看好像不是二聚体,应该是非特异性条带,你可以跑个电泳看看,建议重新设计引物。
4楼2009-11-14 20:05:20
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jianandy

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
小峰应该是引物二聚体,推荐降低反应体系中的引物浓度
2楼2009-11-14 19:56:49
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jianandy

金虫 (著名写手)

不过不清楚你的标准样跟样品的区别
3楼2009-11-14 19:58:16
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jia901

铜虫 (小有名气)

引物都是文献上的啊,不是我自己设计的。
跑电泳有轻微的二聚体,而且溶解的温度看的话也不像是引物二聚体。
非特异性的条带也没有。看看电泳图,前面4个是标线的样品。
5楼2009-11-14 20:20:42
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