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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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jia901

铜虫 (小有名气)

[交流] 定量PCR的溶解曲线问题

前些天实验时候,发现样品的溶解曲线俩峰。于是变了下升温程序,结果反而标准样溶解曲线一直有俩峰,而且浓度越低,小点的峰就越高。样品反而只有一个峰,而且标准样的峰跟样品的不太重合。升高了2度退火温度,发现不起作用,片段长度600多。

高手们支个招啊。怎么个情况啊,如果优化的话优化哪些指标啊。
见图。
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六妖妖

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lz查文献得到的引物是用来做SYBR的还是做探针的?SYBR的话最好还是400bp以内比较好。从你的电泳图来看,明显有非特异扩增,而且是大片段产物。最根本的解决方法是重新设计引物。实在不愿意重新设计引物就试试温度梯度筛选一个比较好的退火温度。
6楼2009-11-14 22:35:04
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