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【不合理蛙科研实验过程分享】酶解-显色法:淀粉含量30 min出结果
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【取样】 粉碎过0.5 mm筛,105 ℃烘至恒重,称取0.2 g(±0.1 mg)于15 mL离心管,避免吸潮。 【脱脂】 加5 mL石油醚,涡旋30 s,3000 g离心3 min,弃上清,重复1次,去除脂肪防干扰。 【 gelatinization】 加5 mL 0.1 mol/L乙酸缓冲液(pH 5.0),沸水浴糊化15 min,每5 min轻摇防结块。 【酶解】 加100 µL热稳定α-淀粉酶(10 U),95 ℃ 20 min → 冷却至50 ℃ → 加100 µL淀粉葡萄糖苷酶(15 U),50 ℃ 30 min,水解为葡萄糖。 【显色】 取0.1 mL上清 + 3 mL GOPOD显色剂,50 ℃ 20 min,540 nm测吸光度,空白同步。 【计算】 葡萄糖标准曲线R²≥0.999,结果×0.9换算淀粉,RSD<2 %。 【心得】 酶批号锁定,效期≤1年;显色后30 min内读完,防褪色;样品含蔗糖时加0.1 U转化酶预处理 |
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