应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切问题
151/2返回列表12下一页
查看: 945  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切问题

今天第一次用EcoR1和Xho1做双酶切切质粒，37° 3h，师兄说差不多了，结果切出来，差很多，基本上算是没切动，大家一般做双酶切都是切多长时间啊，体系是怎样呢？
我今天做的1*H 2ul   EcoR1 1ul  Xho1  1ul 质粒 6ul  ddH2O 10ul
总体积20ul
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-02 21:20:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whisht

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做酶切时，用的是4小时多一些
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-11-02 21:22:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by whisht at 2009-11-2 21:22:
我做酶切时，用的是4小时多一些

那你一般加多少质粒呢
赞一下 回复此楼
3楼2009-11-02 21:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迪亚格686

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒浓度可能太高了，一般用一微克的质粒 用试剂盒提的质粒浓度在0.3微克/微升左右 你质粒量偏大了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-11-02 22:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 11-2 22:16
引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-2 21:20:
今天第一次用EcoR1和Xho1做双酶切切质粒，37° 3h，师兄说差不多了，结果切出来，差很多，基本上算是没切动，大家一般做双酶切都是切多长时间啊，体系是怎样呢？
我今天做的1*H 2ul   EcoR1 1ul  Xho1  1ul 质粒 ...

给你推荐个体系：
Buffer 2X Tango：4ul
             EcoR1 ：1ul  
             Xho1  ：1ul
                质粒：6ul（浓度较高的话）
                dd   ：8ul
37℃，3h。如果只是酶切验证的话，体系减半，酶切1h。构建克隆的话体系增大一倍，酶量不变。
赞一下(21人) 回复此楼
5楼2009-11-02 22:02:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-11-2 22:02:

给你推荐个体系：
Buffer 2X Tango：4ul
             EcoR1 ：1ul  
             Xho1  ：1ul
                质粒：6ul（浓度较高的话）
                dd   ：8ul
37℃，3h。如果只是酶切验证的话 ...

弱弱的问一下啊，“Buffer 2X Tango”是何物啊？就是这两个酶的通用缓冲液么？
我准备酶切回收的，那应该增大体系咯？
赞一下 回复此楼
6楼2009-11-02 22:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 迪亚格686 at 2009-11-2 22:01:
质粒浓度可能太高了，一般用一微克的质粒 用试剂盒提的质粒浓度在0.3微克/微升左右 你质粒量偏大了

我用试剂盒提的，感觉提出来的不是很亮，就多加了一点
赞一下 回复此楼
7楼2009-11-02 22:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-2 22:14:

弱弱的问一下啊，“Buffer 2X Tango”是何物啊？就是这两个酶的通用缓冲液么？
我准备酶切回收的，那应该增大体系咯？

Tango这是个通用Buffer，一般为10X，即一般10ul体积加入1ul，用这两种酶进行双酶切，需要用2X的，是两种酶活均保持100%，即10ul体系加2ul。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-11-02 22:18:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提完要定量
酶最好用好点的，takara出了名要切很久很久还不干净的
建议切完之后挖胶不然转化的时候就很好看了……一堆空的
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-11-02 22:18:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-11-2 22:18:
提完要定量
酶最好用好点的，takara出了名要切很久很久还不干净的
建议切完之后挖胶不然转化的时候就很好看了……一堆空的

呃...我是用的TAKARA的
那用什么牌子的酶切的比较好呢
我切了3h，看到了一点点，又做了一些，放到明天早上看看结果
赞一下 回复此楼
10楼2009-11-02 22:22:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小白3521 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +3 kotoko_ik 2026-03-23 4/200 2026-03-23 20:47 by 我的船我的海
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 335求调剂 +3 yuyu宇 2026-03-23 4/200 2026-03-23 19:03 by macy2011
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭