应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切问题
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 978  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切问题

今天第一次用EcoR1和Xho1做双酶切切质粒，37° 3h，师兄说差不多了，结果切出来，差很多，基本上算是没切动，大家一般做双酶切都是切多长时间啊，体系是怎样呢？
我今天做的1*H 2ul   EcoR1 1ul  Xho1  1ul 质粒 6ul  ddH2O 10ul
总体积20ul
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-02 21:20:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 11-2 22:16
引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-2 21:20:
今天第一次用EcoR1和Xho1做双酶切切质粒，37° 3h，师兄说差不多了，结果切出来，差很多，基本上算是没切动，大家一般做双酶切都是切多长时间啊，体系是怎样呢？
我今天做的1*H 2ul   EcoR1 1ul  Xho1  1ul 质粒 ...

给你推荐个体系：
Buffer 2X Tango：4ul
             EcoR1 ：1ul  
             Xho1  ：1ul
                质粒：6ul（浓度较高的话）
                dd   ：8ul
37℃，3h。如果只是酶切验证的话，体系减半，酶切1h。构建克隆的话体系增大一倍，酶量不变。
赞一下(21人) 回复此楼
5楼2009-11-02 22:02:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

whisht

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做酶切时，用的是4小时多一些
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-11-02 21:22:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by whisht at 2009-11-2 21:22:
我做酶切时，用的是4小时多一些

那你一般加多少质粒呢
赞一下 回复此楼
3楼2009-11-02 21:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迪亚格686

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒浓度可能太高了，一般用一微克的质粒 用试剂盒提的质粒浓度在0.3微克/微升左右 你质粒量偏大了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-11-02 22:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 求调剂 +9 吃口冰激凌 2026-04-07 9/450 2026-04-13 08:46 by 紫曦紫棋
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 326求调剂 +6 Shansyn 2026-04-10 6/300 2026-04-12 09:46 by hammer3
[找工作] 山东高校教师考核超级无底线，员工过不下去啦 +4 qut2026 2026-04-09 9/450 2026-04-12 00:54 by qut2026
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:57 by zhq0425
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考研] 一志愿京区985，085401电子信息，本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
[考研] 071000生物学调剂求助 +17 zzzzwww 2026-04-09 20/1000 2026-04-10 15:55 by 求调剂zz
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +20 慕绝cc 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 10:22 by xujun0624
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 复试调剂，一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 349学科化学045106求调剂，化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭